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鼻腔NK/T细胞淋巴瘤目前已经形成了放疗联合以门冬酰胺酶为基础化疗的综合治疗模式。在放疗方面,放疗技术日趋成熟,放射野及放疗剂量已有明确的推荐;但在化疗方面,除门冬酰胺酶的作用已经得到肯定,并成为大多数中心的一线推荐用药外,对于门冬酰胺酶所联合的具体化疗方案,目前还没有达成共识。本研究全面、系统的回顾了本中心鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者接受放疗联合以门冬酰胺酶为基础化疗的疗效及不良反应。并进一步分析了这一综合治疗模式下不同分组患者的疗效差异、不同门冬酰胺酶制剂的选择在疗效以及不良反应方面的差异、门冬酰胺酶所联合的不同化疗方案在疗效及不良反应方面的差异、鼻腔NK/T细胞淋巴瘤继发噬血细胞综合征时的一线治疗方案,希望能为临床化疗方案的选择及进一步的临床研究提供参考。同时,我们还在植物来源的52种萜类化合物中进行了抗T/NK细胞淋巴瘤活性先导化合物的筛选,希望能进一步开发出用于T/NK细胞淋巴瘤治疗的新药。第一部分以门冬酰胺酶为基础的联合化疗在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中的疗效及相关分析目的:获得鼻腔NK/T细胞淋巴瘤临床特征的单中心数据,了解以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中的疗效及不良反应,分析不同分组患者在疗效方面的差异。方法:收集我中心2006年6月到2014年11月期间收治的初治鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者的临床数据,这些患者接受了以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗,统计患者在治疗期间的不良反应、疾病的缓解率及患者生存情况。结果:1单中心数据显示:鼻腔NK/T细胞淋巴瘤以60岁以下患者为主(占87%),局限期患者占80%,68%的患者有B症状,56%的患者在发病时存在发热,大部分患者在IPI分组为低危及低中危组(占90%),30%的患者在发病时存在贫血,29%患者在发病时存在低白蛋白血症,25%患者在发病时存在LDH水平的升高;2以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗,可以获得92.0%的总有效率(83.0%CR,9.1%PR)。进一步亚组分析显示:局限期患者的CR率(90.1%)要显著高于进展期患者(52.9%);IPI低危+低中危组患者的CR率(87.3%)显著高于高危+高中危组患者(44.4%);血清白蛋白正常组患者的CR率(91.9%)显著高于合并低白蛋白血症组患者(60.0%);LDH正常组患者的CR率(87.7%)显著高于LDH升高组患者(65.0%),而根据年龄、B症状、发热等进行的分组,未发现患者的缓解率有差异;3患者进行中位14个月的随访(0.9个月-85.6个月),2年生存率为73.9%,5年生存率为61.3%。进一步亚组分析显示:局限期患者的生存较进展期患者有显著差异(P=0.007);IPI分组低危+低中危组的生存较高危+高中危组具有显著差异(P=0.040);血清白蛋白正常组患者的生存与合并低白蛋白血症患者比较具有显著差异(P=0.005)。而根据年龄、是否有B症状、发热、是否贫血及LDH水平进行的分组方面,患者的总生存不具有显著差异;4以门冬酰胺酶为基础的联合化疗的主要不良反应:白细胞减少发生率为76.9%(3/4级白细胞减少发生率44.1%),血小板减少发生率为25.2%(3/4级血小板减少发生率8.5%),贫血发生率为67.0%(3/4级贫血发生率13.9%),中性粒细胞减少伴发热的发生率为20.8%,低纤维蛋白原血症的发生率为40.0%(3/4级低纤维蛋白原血症发生率为5.1%),转氨酶升高的发生率为37.0%(3/4级转氨酶升高发生率1.6%),胆红素升高发生率10.2%(3/4级胆红素升高发生率1.8%),低白蛋白血症发生率为52.2%(3/4级白蛋白减低发生率2.1%)。小结:鼻腔NK/T细胞淋巴瘤以中青年患者为主,大多数患者处于临床I/II期。以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗在局限期鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中获得了比较理想的疗效,但对于进展期及IPI评分高危及高中危组患者,疗效尚不理想。门冬酰胺酶联合化疗的主要不良反应为白细胞减少及由此导致的感染、贫血、低纤维蛋白原血症、低白蛋白血症等。第二部分L-Asp/PEG-Asp联合CHOP/EPOCH/GDP方案在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中的疗效及不良反应分析目的:了解不同门冬酰胺酶制剂(L-Asp/PEG-Asp)联合不同化疗方案(CHOP/EPOCH/GDP)在疗效、生存及不良反应方面的差异。方法:前述第一部分研究中入组的初治鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者,接受了以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗。分析门冬酰胺酶制剂(L-Asp或PEG-Asp)的选择、具体化疗方案(CHOP或EPOCH或GDP)的选择在CR率、总生存及不良反应方面的差异。结果:1L-Asp和PEG-Asp在CR率方面没有显著差异,GDP方案的CR率可能优于CHOP/EPOCH方案;2 L-Asp组和PEG-Asp组患者在总生存方面没有显著差异;CHOP组、EPOCH组和GDP组患者在总生存方面也没有显著差异;3 CHOP、EPOCH、GDP三个方案3/4级白细胞减少的发生率分别为43.6%、60.1%和20.5%,存在显著差异。GDP方案血小板减少的发生率(44.3%)显著高于CHOP方案(21.0%)和EPOCH方案(17.6%),GDP方案3/4级血小板减少的发生率(21.6%)显著高于CHOP方案(5.0%)和EPOCH方案(4.1%)。GDP方案贫血发生率(75%)显著高于EPOCH方案(58.1%),但CHOP、EPOCH、GDP三个方案在3/4级贫血的发生率(17.7%、10.1%和11.4%)方面不具有显著差异。PEG-Asp组低纤维蛋白原血症的发生率(57.6%)显著高于L-Asp组(32.7%),PEG-Asp组3/4级纤维蛋白原减少的发生率(12.2%)显著高于L-Asp组(1.8%)。PEG-Asp组患者低白蛋白血症的发生率(80.4%)显著高于L-Asp组患者(38.3%),但在3/4级低白蛋白血症的发生方面两者不具有显著差异。EPOCH方案FN的发生率(31.8%)显著高于CHOP方案(19.3%)和GDP方案(8.0%)。小结:PEG-Asp和L-Asp在疗效上未见显著差异,但PEG-Asp低白蛋白血症、低纤维蛋白原血症的发生率较L-Asp显著增加。在联合门冬酰胺酶后,CHOP方案仍是一个有效且安全性较高的方案,但EPOCH方案在疗效上并没有进一步提高,反而使3/4级白细胞减少、FN的发生率较CHOP方案显著增加;GDP方案在CR率方面可能具有一定的优势,但要对其血小板减少和贫血等不良反应引起重视。第三部分鼻腔NK/T细胞淋巴瘤合并噬血细胞综合征的临床特征及一线治疗方案探讨目的:了解NK/T-LAHS的发病特征,不同治疗方案在NK/T-LAHS中的缓解率及生存情况。方法:收集2006年5月到2013年12月期间收治的NK/T-LAHS患者的临床资料,患者接受LOD方案(L-Asp、长春新碱、地塞米松)或非LOD方案(不含L-Asp的方案,主要是激素,部分患者联合了长春新碱、足叶乙苷等),统计治疗期间体温、血象、肝功能的动态变化以及患者对治疗的反应。结果:1入组15例患者,中位年龄32岁(24岁-67岁),ECOG评分2分及以上的患者占46.7%,进展期患者占66.7%,患者均有发热,80.0%超声检查发现有脾大。IPI评分高中危+高危患者占(40.0%+26.7%)。15例患者中,5例(33.3%)在初诊时、2例(13.3%)在放化疗期间、8例(53.3%)在疾病复发/进展时出现噬血细胞综合征。80.0%出现白细胞减少,46.7%出现贫血,46.7%出现血小板减少,53.3%出现纤维蛋白原下降,86.7%出现转氨酶升高,53.3%出现胆红素升高,66.7%出现低白蛋白血症,53.3%骨髓中见到噬血现象,80.0%出现LDH升高;2患者接受LOD方案或非LOD方案,LOD治疗组7例患者中3例CR、4例PR,患者的平均生存时间405.0天,非LOD治疗组平均生存时间21.8天,因生存时间短,未行疗效评估,两组患者的生存具有显著差异;3 LOD组的7例患者中,6例在化疗次日体温恢复正常,1例在化疗第3天体温恢复正常。在LOD化疗开始后,患者血象可能有暂时轻度下降,出现血象最低的中位时间是化疗第3天,患者血象恢复的中位时间是化疗后第4天。LOD方案化疗后患者肝脏酶学指标恢复的中位时间是在化疗第7天。小结:NK/T-LAHS主要发生于进展期及复发/难治的鼻腔NK/T细胞淋巴瘤。当患者出现不能解释的发热、血细胞减少、肝功能异常及凝血异常时,要考虑到噬血细胞综合征的可能。与以激素为主的治疗相比,含L-Asp的LOD方案能使近半数的患者获得CR,并明显延长患者的生存,且不良反应小、耐受性好。第四部分植物中萜类化合物体外抗人T/NK细胞淋巴瘤活性筛选及相关机制研究目的:从菊科植物土木香、旋覆花和蓍草以及东北红豆杉可再生针叶中提取纯化的萜类化合物中筛选具有抗T/NK细胞淋巴瘤活性的先导化合物,并探讨其抗肿瘤机制,开发用于T/NK细胞淋巴瘤治疗的植物来源新药。方法:从菊科植物土木香、旋覆花和蓍草中提取纯化得到的39种倍半萜内酯化合物和从东北红豆杉可再生针叶中提取纯化得到的13种二萜类化合物作为筛选对象,通过MTT比色法检测终浓度为100μmol/L的52种萜类化合物对淋巴瘤细胞株HUT78和SNK6的抑制活性,选取抑制率在80%以上的萜类化合物,进一步检测其在10个梯度浓度下对HUT78和SNK6细胞的抑制率,计算其半数抑制浓度(IC50),并通过流式细胞术检测肿瘤细胞在化合物作用下的细胞凋亡情况,通过Western blot分析肿瘤细胞在化合物作用下p53、Bax和caspase-3的表达情况,探讨其抗肿瘤机制并进行相关机制的研究。结果:菊科植物土木香、旋覆花和蓍草中分离纯化得到的39种萜类化合物中,化合物Eupatolid(6),4-dehydroxy-1,10-epoxy-Achillinin A(34),Millifolide B(39)在终浓度100μmol/L下,对HUT78及SNK6淋巴瘤细胞的抑制率在80%以上;东北红豆杉可再生针叶中提取纯化得到的13种萜类化合物中,化合物9,10-deacethyltaxinine(42)和taxagifine(52)对HUT78及SNK6淋巴瘤细胞的抑制率在80%以上。进一步检测这5种萜类化合物对HUT78和SNK6细胞的IC50,并与阳性对照顺铂比较:化合物(6)、(34)、(39)、(42)、(52)对HUT78细胞的IC50值分别为25.01μmol/L、19.10μmol/L、21.80μmol/L、18.45μmol/L、32.57μmol/L,其中化合物(6)、(34)、(39)、(42)的IC50值低于顺铂对HUT78细胞的IC50值(29.08μmol/L),其对HUT78细胞增殖的抑制活性高于顺铂;化合物(6)、(34)、(39)、(42)、(52)对SNK6细胞的IC50值分比为21.57μmol/L、12.77μmol/L、33.69μmol/L、27.63μmol/L、14.89μmol/L,低于顺铂对SNK6细胞的IC50值(48.02μmol/L),其对SNK6细胞增殖的抑制活性高于顺铂。化合物(42)可以通过上调细胞内的p53和Bax、caspase-3表达、诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤机制。小结:从菊科植物土木香、旋覆花和蓍草中提取纯化得到的3种倍半萜内酯化合物和从东北红豆杉可再生针叶中提取纯化得到的2种二萜类化合物对HUT78和SNK6淋巴瘤细胞株具有较强的增殖抑制活性,部分化合物的增殖抑制活性强于顺铂。其抗肿瘤机制可能是上调细胞内的p53和Bax、caspase-3表达、诱导细胞凋亡。结论:1鼻腔NK/T细胞淋巴瘤以中青年患者为主,大多数患者处于临床I/II期。以门冬酰胺酶为基础的化疗联合受累野放疗在局限期鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中获得了比较理想的效果,但对于进展期及IPI评分高危及高中危组患者,疗效尚不理想。门冬酰胺酶联合化疗的主要不良反应为白细胞减少及由此导致的感染、贫血、低纤维蛋白原血症、低白蛋白血症等。2 PEG-Asp和L-Asp在疗效上未见显著差异,但PEG-Asp低白蛋白血症、低纤维蛋白原血症的发生率较L-Asp显著增加。在联合门冬酰胺酶后,CHOP方案仍是一个有效且安全性较高的方案,但EPOCH方案在疗效上并没有进一步提高,反而使3/4级白细胞减少、FN的发生率较CHOP方案显著增加;GDP方案在CR率方面可能具有一定的优势,但要对其血小板减少和贫血等不良反应引起重视。3 NK/T-LAHS主要发生于进展期及复发/难治的鼻腔NK/T细胞淋巴瘤。当患者出现不能解释的发热、血细胞减少、肝功能异常及凝血异常时,要考虑到噬血细胞综合征的可能。与以激素为主的治疗相比,含L-Asp的LOD方案能使近半数的患者获得CR,并明显延长患者的生存,且不良反应小、耐受性好。4从菊科植物土木香、旋覆花和蓍草中提取纯化得到的3种倍半萜内酯化合物和从东北红豆杉可再生针叶中提取纯化得到的2种二萜类化合物对HUT78和SNK6淋巴瘤细胞株具有较强的增殖抑制活性,部分化合物的增殖抑制活性强于顺铂。其抗肿瘤机制可能是上调细胞内的p53和Bax、caspase-3表达、诱导细胞凋亡。