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紫杉烷类化合物是从红豆杉中获得具有独特作用机制的抗癌天然产物,其中紫杉醇已被多个国家批准用于临床治疗卵巢癌和乳腺癌等。
红豆杉中紫杉烷类化合物的含量分析对于指导它的生产具有重要意义。本文建立了快速真空液相层析(VLC)富集紫杉烷类化合物的HPLC前处理方法,并用HPLC法分析富集物中主要紫杉烷类化合物含量。结果表明:经该前处理方法的富集物中各紫杉烷类化合物含量比原植物提高93.6倍以上,回收率在95%以上,色素和大量杂质被硅胶吸附,有利于提高微量化合物分析的准确度,非常适合HPLC进样分析前的准备工作。HPLC法定量分析结果表明:1、加拿大红豆杉(枝叶)中10-DABⅢ和9-羟基-13-乙酰基巴卡亭Ⅲ含量较高;东北红豆杉(树皮)中7-木糖紫杉醇和三尖杉宁碱含量较高;而紫杉醇含量在东北红豆杉(树皮)中最高,曼地亚(枝叶,搁置一年)次之,两者紫杉醇含量都已接近万分之三;2、首次对矮紫杉(Little Japanese Yew)中主要紫杉烷类化合物含量进行了分析,结果表明:作为中国东北地区的一种观赏性植物的矮紫杉,具有紫杉烷类化合物的生产价值,其中7-木糖紫杉醇、紫杉醇和三尖杉宁碱的含量分别为0.0016%、0.0086%、0.0088%,如果被广泛种植对于解决目前紫杉烷类植物原料资源匮乏具有积极意义。
本文系统地研究了紫杉烷类化合物及其杂质的正相薄层色谱行为,并对13种展开剂系统进行了优化,对TLC的Kf值图分析结果表明:二氯甲烷/正丁醇体系适合各种紫杉烷类化合物分段分离,丙酮/环己烷体系适合紫杉醇与其它杂质的分离,二氯甲烷/异丙醇体系适合紫杉醇与三尖杉宁碱的分离,为紫杉醇的柱色谱分离建立了最优分离条件。
以东北红豆杉(树皮)和加拿大红豆杉(枝叶)为原料,用优化后的色谱分离条件对主要紫杉烷类化合物进行了中试规模的分离纯化。从两种植物中分离得到紫杉醇、三尖杉宁碱、9-羟基-13-乙酰基巴卡亭Ⅲ、7-木糖紫杉醇、10-DABⅢ五种紫杉烷类化合物。结晶纯化后五种紫杉烷类化合物纯度均达到了98.5%以上。