基于磁性纳米材料的配体垂钓对中药材降脂成分的研究

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肥胖症作为一种能量代谢紊乱疾病成为世界性的健康问题,已被证实与多种代谢性疾病的发生密切相关。脂肪酶抑制剂可以抑制脂肪酶活性,通过减少进入体内的脂肪代谢而实现减肥作用。因此,使用脂肪酶抑制剂类药物是治疗肥胖症的主要手段之一。药用植物提取物作为天然脂肪酶抑制剂的来源,在新型减肥药品的开发中具有非常巨大的潜力。本论文针对中药中脂肪酶抑制剂的高效筛选和快速鉴定的问题,通过将胰脂肪酶共价结合于磁性纳米粒子表面而建立成一种特异性强的垂钓体系,将其用于“垂钓”中药材中降脂活性成分。  本学位论文主要内容如下:  第一章为磁性纳米粒子的制备和表征。首先利用低温双相回流方法制备Fe3O4磁性纳米粒子(MNPs),然后采用Triton X-100/正己醇/环己烷/水反相微乳液体系,利用原硅酸四乙酯水解对MNPs包裹SiO2以及使用3-氨基丙基三甲氧基硅烷对材料进行氨基修饰,得到氨基修饰的MNPs。通过红外光谱和X射线衍射对材料进行了定性分析,通过透射电镜和动态光散射对材料进行了形态和粒径表征。  第二章为磁性纳米粒子的功能化,以及功能化磁性纳米粒子的性质测试。以戊二醛为交联剂,将猪胰脂肪酶(PPL)固定在氨基修饰的磁性纳米材料上。通过单因素考察方法和正交试验法,采用考马斯亮兰法测定磁性纳米材料固定PPL的蛋白含量以及对硝基苯酚法测定固定化PPL的酶活力,系统优化了磁性纳米材料固定PPL的条件。在最优条件下,固定化酶较自由酶的相对酶活提高了3.0倍。  第三章为以功能化磁性纳米粒子对中药材中活性成分的定向分析(配体垂钓)。用人血清白蛋白(HSA)功能化的磁性纳米材料垂钓中药材,结合质谱技术分析了从银杏叶中垂钓出的10个黄酮类化合物;基于PPL功能化的磁性纳米材料对植物提取物进行垂钓,通过超高效液相色谱-串联质谱以及高效液相色谱,系统分析了乌龙茶、荔枝核、大黄以及月季花的垂钓结果。其中乌龙茶所垂钓出的三个化合物(-)-epigallocatechin-3-O-gallate、(-)-gallocatechin-3-O-gallate和(-)-epicatechin-3-O-gallate对PPL的有良好的抑制作用。从大黄中垂钓出的芦荟大黄素和大黄素,以及从月季花中垂钓出的3-O-[6-O-(p-coumaroyl)-β-D-glucosyl]quercetin和3-O-[6-O-(p-coumaroyl)-β-D-glucosyl]kaempferol都对PPL具有一定的抑制作用。  最后一章综述了天然脂肪酶抑制剂及其筛选方法的研究进展。  
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