【摘 要】
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猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-Co V）是一种新型阿尔法冠状病毒,可致仔猪急性腹泻、呕吐,甚至是死亡。2017年在中国广东地区首次爆发SADS疫情,本实验室课题组从发病猪场分离到该病毒并对其进纯化和鉴定。为了进一步研究其生物特性以及寻找针对此病毒有效的防治方法,本文将实验室保存的SADS-Co V-CN/GD
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猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-Co V）是一种新型阿尔法冠状病毒,可致仔猪急性腹泻、呕吐,甚至是死亡。2017年在中国广东地区首次爆发SADS疫情,本实验室课题组从发病猪场分离到该病毒并对其进纯化和鉴定。为了进一步研究其生物特性以及寻找针对此病毒有效的防治方法,本文将实验室保存的SADS-Co V-CN/GDWT/2017毒株在Vero细胞上进行连续培养。在第七代时发现此病毒在Vero细胞上能够产生稳定的细胞病变,并适应这种培养方式。在之后的传代过程中每十代对其进行一次噬斑纯化,并且对其病毒滴度进行检测,结果发现随着代次的升高其毒价也不断上升,说明SADS-Co V-CN/GDWT/2017毒株的细胞适应性增强。为了进一步研究其生物特性改变的原因,我们对传代过程中的P7、P18、P48以及P83代的全基因进行克隆和分析。测序分析结果显示四个毒株的全基因序列同源性在99.9%-100%之间,全长均约27kb。同时我们发现与P7代次毒株的全基因相比,P83的全基因中有15个位点发生了碱基突变,导致9个相对应的氨基酸发生改变,此外P83和P48在26619-26676bp处均有一段长达58bp的核苷酸缺失;进一步分析发现这段58bp的缺失导致了NS7a基因编码蛋白的前部19个氨基酸发生了改变,同时有20个额外的氨基酸被编码,这可能使NS7a蛋白功能发生改变。同时这段缺失使NS7b的起始密码子丢失,进而导致NS7b无法编码相应的蛋白。通过动物实验对P83毒株的致病性进行评估,进一步确定其病毒毒力是否减弱。实验共分为P7,P83和对照组三个试验组,以六天龄仔猪为实验对象。实验结果显示,攻毒后六小时P7组全部仔猪出现了明显的临床症状,并且在攻毒后第一天的肛拭子中均检测到排毒;P83组的仔猪在攻毒后的第二天只有一头仔猪出现轻微腹泻。P7组的仔猪在扁桃体、胃、十二指肠,空肠、回肠和肠系膜淋巴结等器官都能检测到病毒,其中在回肠中的病毒载量最大;P83组仔猪只有回肠和肠系膜淋巴结能检测到病毒,病毒的含量很低。病理切片和免疫组化结果表明,P7组仔猪小肠绒毛均出现了病理性的断裂,脱落和皱缩,并在病变明显区检测到大量SADS-Co V抗原;而P83组几乎没有检测到SADS-Co V抗原。对照组均无病理变化。因此可以确定P83代次毒株毒力相对减弱,对仔猪的致病性明显减弱,有望作为制备弱毒疫苗的候选毒株。
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