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随着生活水平的提高，食物过敏越来越受到人们的重视。缢蛏(Sinonvaculaconstricta)是常见的海产品，也是重要的食物变应原，对缢蛏过敏严重影响人们的生活质量。变应原是诊断和治疗变态反应性疾病的基础。因此，对缢蛏变应原的分析、鉴定与分子生物学研究将为临床上诊断和治疗该变态反应性疾病奠定坚实的基础。
本研究首先对缢蛏主要变应原进行分析、鉴定与纯化。以磷酸盐缓冲液提取蛋白，通过SDS-PAGE对其抗原成份进行分析，选用缢蛏过敏患者的阳性血清进行免疫印迹(Western-Blot)，以鉴定出主要与次要变应原。用HPLC纯化主要变应原蛋白，并对其主要变应原免疫学活性进行鉴定。结果表明：缢蛏粗提液SDS-PAGE显示有18条蛋白条带，含量高的蛋白有6条，其分子量分别为：110、55、42、38、35和28kD，其中以35kD处最为富集。Western-Blotting显示58kD蛋白为缢蛏的主要变应原，而72、38、28和1l kD蛋白为缢蛏的次要变应原。HPLC体积排阻纯化后得到9个峰，这9个峰经SDS-PAGE检测后发现58 kD的蛋白位于第4峰中。将第4峰中蛋白用HPLC反相纯化，最后得到两个峰，经Western-Blot鉴定后发现58kD的主要变应原在反相纯化的第2峰中。因此，本实验对缢蛏变应原进行了分析和鉴定，并纯化出缢蛏的主要变应原。
本研究还克隆缢蛏中泛变应原tropomyosin基因，并对其重组、表达、纯化和免疫特性鉴定。采用生物信息学方法对多种动物泛变应原基因进行序列同源性比对，根据序列保守区域设计并合成简并性引物，通过RT-PCR克隆缢蛏中泛变应原tropomyosin的基因，并进行序列分析。基因连入T载体(pMDl8)，经扩增后，用NdeI和EcorI双酶切，将目的片段连入pET-28a表达载体，得到的重组质粒转入工程菌E.coliBL21(DE3)中，经IPTG诱导表达出重组tropomyosin蛋白，表达产物经镍离子亲和层析柱纯化，用Western Blot检测免疫学活性，MALDI-TOF-MS质谱分析进一步证实该重组变应原的正确性。结果：获得了一个长852 bp的新基因，编码283个氨基酸，通过比对发现与其它的tropomyosin有很高的同源性，经分析该蛋白等电点为4.12，理论分子量为33 kD。此序列已被GenBank收录，登陆号：EFl07528。此基因重组表达后的蛋白具有良好的反应原性，并经MALDI-TOF-MS质谱证实为tropomyosin。本研究表明：实验成功地从缢蛏中克隆得到泛变应原tropomyosin基因，此基因重组表达后的蛋白具有良好的反应原性，为缢蛏过变态反应性疾病的诊断和免疫治疗奠定了基础。