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研究目的研究葛根芩连汤(GQD)主要功效成分在大肠杆菌致泻小型猪小肠吸收及在小肠黏膜酶中的代谢。实验方法1、HPLC-MS/MS建立GQD主要功效成分在肠液和PBS中含量测定方法;2、以Ka和Papp为指标,通过在体肠灌流实验研究GQD主要功效成分在腹泻空肠、回肠中的吸收特点;3、以浓度为指标,利用肠黏膜酶孵化实验观察GQD主要功效成分在腹泻和正常黏膜酶中的代谢差异;4、以Ka和Papp为指标,通过外翻肠囊法实验观察GQD主要功效成分在腹泻空肠、回肠中的吸收情况,并利用P-gp和MRP2抑制剂维拉帕米和丙磺舒,探索生理与病理小肠对GQD主要成分吸收差异的原因。实验结果1、在体肠灌流实验中,葛根素、大豆苷、大豆苷元、黄芩苷和小檗碱在病理空肠组吸收比生理组显著加快,(Ka和Papp分别为55.96±34.95、69.20±35.93、31.02±28.90、61.49±31.67、47.37±41.21 ×10-4 min-1和14.42±8.70、18.67±9.19、7.32±6.69、16.22±8.19、11.91±10.12 ×10-4 cm·min-1),在正常空肠组Ka和Papp分别为 15.49±11.98、16.38±10.93、-5.95±18.26、13.24±9.51、12.61±14.51 × 10-4 min-1 和 5.24±3.01、6.59±4.55、-2.00±5.62、5.07±3.93、4.78±4.10×10-4 cm·min-1。药根碱、巴马汀、汉黄芩素和甘草苷的在体吸收与正常组相比无统计学差异。2、在黏膜酶孵化实验中,正常组中的葛根素、大豆苷和甘草苷的浓度显著低于在病理组中相应物质的浓度。浓度差(正常-病理)分别为-6.64±1.20、-17.00±0.40、-2.43±0.31μg·mL-1。大豆苷元和汉黄芩素正常组的浓度显著高于病理组。浓度差(正常-病理)分别为9.04±0.16、0.43±0.114μg·mL-1。不同黏膜酶对药根碱和巴马汀的代谢作用无显著性差异。3、在外翻肠囊法实验中,葛根素在正常空肠丙磺舒组吸收高于其他组(Ka和Papp分别为0.84±0.59×10-3μg·min-1 ·cm-2、13.58±9.53 ×10-6cm·min-1)。大豆苷在正常空肠丙磺舒组吸收高于其他组(Ka和Papp分别为 0.08±0.09 ×10-3μg·min-1·cm-2、3.32±3.67×10-6cm·min-1)。大豆苷元在模型空肠丙磺舒、维拉帕米以及模型回肠空白组吸收高于其他组(Ka和Papp分别为0.57±0.24、0.45±0.31、0.66±0.25×10-3μg·min-1·cm-2和200.45±83.24、158.25±109.59、232.13±89.21×10-6cm·min-1)。小檗碱在模型空肠丙磺舒、维拉帕米组吸收高于其他组(Ka和Papp分别为0.20±0.08、0.17±0.13 ×10-3μg·min-1·cm-2和 7.30±3.02、6.26±4.57 × 10-6 cm·min-1)。汉黄芩素在模型、正常回肠空白组吸收高于其他组(Ka和Papp分别为0.10±0.07、0.12±0.08 ×10-3μg·min-1·cm-2和 36.77±25.06、42.18±29.41 ×10-6 cm·min-1)。实验结论1、小型猪E-coli腹泻可以促进葛根素、大豆苷、小檗碱、黄芩苷等物质的在体吸收速率,空肠是这些物质的主要吸收部位。2、病理黏膜酶对葛根素、大豆苷、甘草苷、小檗碱代谢能力显著低于正常黏膜酶。感染性腹泻影响了小肠黏膜酶的活性。3、葛根素、大豆苷、大豆苷元、小檗碱、巴马汀可能是P-gp底物;葛根素、大豆苷、大豆苷元、黄芩苷、药根碱可能是MRP2底物,而小檗碱可能不是MRP2底物,汉黄芩素和黄芩苷可能不是P-gp底物。腹泻状态下,外排蛋白对葛根素、大豆苷、大豆苷元、黄芩苷、小檗碱的外排作用减弱,使葛根芩连汤有效成分吸收相对增加。