水翁花对胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制活性及作用机制初步探讨

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肥胖正在成为本世纪全球健康的最大威胁之一。它是心血管疾病、Ⅱ-型糖尿病、中风、冠心病、高血压、脂质异常血症及某些癌症(如胸腺癌、卵巢癌和结肠癌)等发生的主要诱因。抑制消化酶活性是目前防治肥胖应用最广泛的方法,而植物中的天然抑制剂具有高效、低毒、无副作用等优势,因此,从中药中筛选天然的消化酶抑制剂,成为研究减肥治疗药物的热点。课题组前期研究发现水翁花具有多种生物活性,如抗肿瘤活性、逆转多药耐药活性、保肝护肝活性等。本论文对水翁花的胰脂肪酶和胰α-淀粉酶抑制活性有效部位进行了筛选,对其作用机制进行了初步探讨。首先,利用超声提取法制备水翁花的提取物。水提物、30%乙醇提取物、60%乙醇提取物、95%乙醇提取物、石油醚提取部位和乙酸乙酯提取部位的得率分别是18.18%、18.48%、19.48%、20.35%、1.64%和10.20%。利用有机溶剂萃取法、硅胶柱色谱、重结晶等方法对水翁花中主要成分2’,4’-二羟基-6’-甲氧基-3’,5’-二甲基查尔酮(DMC)进行分离制备,得率为0.62%o,HPLC方法检测纯度为98.57%。其次,利用胰脂肪酶和胰α-淀粉酶模型筛选具有抑制活性的有效部位,对胰脂肪酶的抑制活性:DMC、石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和95%乙醇提取部位具有较强抑制活性,其IC50值分别为101.5μM、38.65μg/mL、76.62μg/mL和109.76μg/mL,水提物几乎无抑制作用。各有效部位在pH8.0时对胰脂肪酶抑制效果最佳,抑制率在反应10min后趋于稳定,抑制作用类型为非竞争性抑制。对胰α-淀粉酶的抑制活性:DMC、水提物、30%乙醇提取物和60%乙醇提取物的抑制作用较强,抑制率达到50%以上,其IC50值分别为69.35μM、73.10μg/mL、165.93μg/mL、231.23μg/mL、而95%乙醇提取物、石油醚部位、乙酸乙酯部位抑制效果稍差。各有效部位在pH7.0时胰α-淀粉酶抑制效果最佳,抑制作用类型为竞争性抑制。最后,为了确定水翁花提取物抑制胰脂肪酶和胰α-淀粉酶的物质基础,通过HPLC和UV方法分析提取物中DMC和总多酚的含量。结果表明:石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位、乙醇提取部位中的DMC含量依次降低;水提物、乙醇提物、石油醚部位和乙酸乙酯部位的总多酚含量依次降低。发现水翁花对胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制作用与DMC和多酚的存在具有一定的相关性。
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