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背景:弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是一种侵袭性淋巴瘤,预后差。在活化的B细胞样(activated B-cell-like,ABC)DLBCL中,损伤最严重的信号通路汇聚到异常激活Toll样受体(TLR)7/9/MYD88通路,从而避免细胞死亡和化疗抵抗。MYD88的功能增益突变增强了NF-κB和JAK-STAT信号通路,并与ABC型DLBCL发病机制中TLR信号的失调有关。因此,抑制TLR信号网络可能是提高临床疗效的关键。在本研究中设计了一种新合成的TLR7和TLR9寡核苷酸拮抗剂,称为HJ901,它与TLR7/9竞争性结合。本研究分析了HJ901在不同DLBCL细胞系中的抑制作用,并在异种移植小鼠模型中验证了其对肿瘤的抑制作用。本研究发现HJ901显著抑制了具有MYD88 L265P突变的多种DLBCL细胞系中TLR7和TLR9介导的细胞增殖和细胞因子的产生,呈时间和剂量依赖性。此外,HJ901在具有MYD88 L265P突变的DLBCL异种移植小鼠模型中阻止肿瘤生长和下调NF-κB和JAK2-STAT3信号通路。这些结果阐明了合成的寡核苷酸拮抗剂HJ901与TLR7/9竞争性结合的抗肿瘤作用,可能与下调NF-κB和JAK2-STAT3信号通路有关,并可能为靶向治疗具有MYD88 L265P突变的ABC型DLBCL患者提供新的治疗方案和理论依据。目的:通过体内体外实验分析HJ901对MYD88 L265P突变型、MYD88野生型(WT)型ABC-和GCB-DLBCL肿瘤细胞的影响,深入探讨HJ901抑制MYD88 L265P突变的ABC型DLBCL细胞增殖的作用及其机制的研究。方法:1.本研究通过SEAP检测HJ901对TLR7或TLR9的选择性抑制作用。2.通过CFSE及CBA实验建立筛选HJ901作用于h PBMCs增殖和细胞因子分泌情况。3.WST1及CBA实验检测HJ901对IMQ或Cp G 685介导的人外周血单个核细胞、MYD88 L265P突变ABC型DLBCL细胞、MYD88野生ABC型和GCB型DLBCL细胞增殖和细胞因子分泌的影响。4.在NOD-SCID小鼠体内分别建立TMD8和U2932肿瘤模型,观察HJ901对TMD8以及U2932肿瘤模型鼠存活时间及肿瘤生长的影响。5.通过HE染色检测HJ901对TMD8以及U2932肿瘤模型鼠肿瘤组织形态的影响;免疫组化实验检测HJ901对TMD8以及U2932肿瘤模型鼠肿瘤组织中Ki-67表达的影响。6.通过流式细胞术检测HJ901对MYD88 L265P突变型和MYD88野生型DLBCL细胞细胞周期和凋亡的影响。7.通过Western blot实验检测HJ901对MYD88 L265P突变型和MYD88野生型DLBCL肿瘤细胞和模型鼠肿瘤组织中信号通路的影响。结果:1.HJ901显著抑制IMQ或Cp G 685诱导HEK-Blue-h TLR7或-h TLR9细胞的SEAP活化,抑制作用具有浓度和时间依赖性。2.HJ901显著抑制IMQ或Cp G 685介导的h PBMCs增殖和细胞因子IL-6和IL-10分泌,抑制作用具有浓度和时间依赖性。3.HJ901显著抑制MYD88 L265P突变ABC型DLBCL细胞增殖及细胞因子分泌,但对于MYD88野生型ABC型和GCB型DLBCL细胞增殖和细胞因子分泌没有抑制作用。4.HJ901显著抑制MYD88 L265P突变TMD8荷瘤小鼠肿瘤的生长,抑制作用具有剂量依赖性,但在MYD88野生型U2932荷瘤小鼠模型中,HJ901对肿瘤生长无明显抑制作用。5.HJ901显著延长TMD8模型小鼠的生存时间,但是对U2932模型小鼠的生存时间无明显影响。6.HJ901显著增大TMD8小鼠模型中肿瘤坏死区域,抑制肿瘤细胞表达Ki-67的表达,且具有浓度依赖性。而在U2932小鼠模型中,HJ901治疗组肿瘤细胞坏死区域和Ki-67表达情况较PBS对照组无明显差异。7.HJ901显著增加MYD88 L265P突变型的OCI-Ly3.3、OCI-Ly10和TMD8细胞中处于细胞周期G1期的细胞比例,显著减少处于S期,G2/M期的细胞比例,且具有浓度依赖性,对MYD88野生型ABC型肿瘤细胞系细胞周期无显著影响。8.HJ901显著降低MYD88突变型肿瘤细胞NF-κB(P65)、IκBα、JAK2以及STAT3分子磷酸化水平,抑制NF-κB以及JAK2-STAT3通路活化,但对MYD88野生型细胞无影响。9.在体内实验中,HJ901可抑制MYD88 L265P突变细胞TMD8荷瘤小鼠肿瘤细胞中NF-κB和JAK2-STAT3信号通路活化,该抑制作用具有浓度依赖性;但是HJ901对MYD88野生型细胞U2932模型小鼠无影响。结论:1.HJ901是TLR7或TLR9的拮抗剂,可以特异地拮抗TLR7或TLR9诱导的免疫反应。2.在MYD88 L265P突变的ABC型DLBCL肿瘤细胞中,HJ901通过调节NF-κB和JAK2-STAT3信号通路,阻滞肿瘤细胞周期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖、炎性细胞因子IL-6和IL-10的分泌。3.在MYD88 L265P突变的DLBCL异种移植小鼠模型中,HJ901增大肿瘤坏死区域,下调NF-κB和JAK2-STAT3信号通路,抑制Ki-67的表达,从而抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长。创新性与意义:该新型HJ901序列不同于已报道4型IMO,为部分硫代修饰的CCT重复序列,设计理念创新,抑制恶性细胞增殖效果显著,本课题将寡核苷酸抑制物应用于治疗具有MYD88 L265P突变的ABC型DLBCL淋巴瘤,国内尚属领先研究,研究不同MYD88突变状态下的ABC型DLBCL细胞的增殖,多维度、全面检测HJ901在不同突变状态下对DLBCL细胞的抑制作用,明确突变对HJ901功能发挥的影响,为临床靶向治疗MYD88 L265P突变的ABC型弥漫大B淋巴瘤的提供治疗策略。