【摘 要】
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目的通过重组质粒载体,慢病毒包装转染技术,体外研究长链非编码RNA(lncRNA)与p53的表达之间关系,同时研究敲低lncRNAp53urlnc对舌鳞癌细胞(SCC-3)的影响,为将来舌鳞癌的治疗
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目的通过重组质粒载体,慢病毒包装转染技术,体外研究长链非编码RNA(lncRNA)与p53的表达之间关系,同时研究敲低lncRNAp53urlnc对舌鳞癌细胞(SCC-3)的影响,为将来舌鳞癌的治疗提供新的思路。方法使用高通量测序技术,对p53诱导上调系统的H1299细胞进行高通量测序技术分析,选取一条受p53诱导上调倍数明显的lncRNA,即lncRNAp53urlnc为研究对象,构建相应重组质粒载体。培养SCC-3细胞,在SCC-3细胞中分别敲低和过表达p53后,提取各组RNA和蛋白,通过Western blot技术检测p53蛋白的表达,通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测lncRNAp53urlnc的表达。构建shlncRNAp53urlnc载体,包装病毒,并转染入SCC-3细胞,qRT-PCR检测转染效率,采用MTT法、集落形成试验来检测转染shlncRNAp53urlnc后SCC-3细胞生长增殖情况。结果 Doxycycline 处理 H1299p53teton 细胞后,p53 和 lncRNAp53urlnc 的表达均随时间而增大;敲低SCC-3细胞中p53的表达,使得SCC-3细胞中lncRNAp53urlnc的表达明显下调;过表达p53基因使得细胞中lncRNAp53urlnc表达明显上调。SCC-3细胞转染shlncRNAp53urlnc载体后,采用qRT-PCR检测细胞中lncRNAp53urlnc的表达水平,发现lncRNAp53urlnc的表达水平下降,说明shlncRNAp53urlnc成功干扰细胞中lncRNAp53urlnc的表达,而MTT法和集落形成实验发现转染shlncRNAp53urlnc载体后的SCC-3细胞的增殖能力以及集落形成能力均增强,说明降低SCC-3细胞中lncRNAp53urlnc的表达可以促进SCC-3细胞的增殖。结论lncRNAp53urlnc受p53基因的正调控,降低lncRNAp53urlnc的表达可以促进CC-3细胞的增殖。
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