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目的:
观察白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞(SZ95)增殖及细胞内雄激素受体(androgenreceptor AR)表达的影响,以探索白地祛脂合剂治疗痤疮的可能作用机制。
方法:
采用Wistar大鼠常规制备含白地祛脂合剂的含药血清,SZ95细胞培养后,分别给予不同浓度的含药血清,剂量分别为大剂量含药浓度20%、中剂量含药浓度10%、小剂量含药浓度5%组和不含血清组。采用CCK-8(cell-counting kit-8)测定含药血清干预对SZ95细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测含药血清干预对SZ95细胞内AR蛋白质表达量的影响;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定含药血清干预对SZ95细胞内ARmRNA表达的影响。
结果:
1.CCK-8检测显示:白地祛脂合剂对于SZ95细胞增殖具有抑制作用,其抑制率与含药血清浓度呈线性关系。含药血清浓度5%组和对照组比较,具有统计学差异(p<0.05);含药血清浓度10%组和对照组比较,具有显著性差异(p<0.01);含药血清浓度20%时抑制率显著升高,具有显著性差异(p<0.001)。
2.光学显微镜观察显示:不同浓度白地祛脂合剂含药血清作用的SZ95细胞均出现单位面积的细胞数量减少,细胞间的连接减少或者消失,细胞形态变圆或者形状不规则,细胞体积变小。其中以20%浓度的白地祛脂合剂含药血清作用下SZ95细胞形态改变最显著。
3.Western bolt检测显示:不同浓度白地祛脂合剂含药血清分别作用于SZ95细胞48h后,均能降低SZ95细胞中AR蛋白质的表达量,各实验组和对照组相比差异有显著性(p<0.05)。
4.Real time-PCR检测显示:不同浓度白地祛脂合剂含药血清分别作用于SZ95细胞48h后,SZ95细胞内ARmRNA表达随血清浓度的升高逐渐降低。中浓度和高浓度的干预,能显著降低ARmRNA的表达,和对照组相比差异具有显著性,其中低浓度组和实验组比较p<0.05,中浓度组和实验组比较p<0.01,高浓度组和实验组比较p<0.001。
结论:
1.白地祛脂合剂能有效抑制SZ95细胞的增殖,表明其具有减少皮脂腺细胞脂质分泌的作用。
2.皮脂腺细胞内AR表达水平明显升高,白地祛脂合剂能降低SZ95细胞中AR蛋白质的表达量及AR的转录水平,表明白地祛脂合剂可能通过抑制SZ95细胞内AR的转录水平调节AR蛋白表达而发挥抗皮脂腺活性的作用,这可能是白地祛脂合剂防治痤疮的主要机理之一。