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目的：采用将人肾小管上皮细胞置于缺氧环境中然后复氧的方法来模拟缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）所致肾损伤的发生和发展过程，并采用“蛋白质组学”的研究方法，通过双向凝胶电泳、质谱分析和生物信息学等技术方法，获得对照组、IR性肾损伤组的肾小管上皮细胞蛋白质图谱。通过对这些图谱进行相互的差异分析并结合INTERNET数据库资料，以寻找IR性肾损伤相关的肾小管上皮细胞特异表达或异常表达的蛋白成分。
方法：人肾小管上皮细胞株（HK-2）按常规方法进行培养，培养液为含10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的DMEM，5%CO2培养箱中常规培养；随机分为IR组、人参皂甙（ginsenosides，GS）+IR组、对照组。其中IR组放入三气培养箱（94%N2、5%CO2、1%O2）中缺氧培养8h，然后于5%CO2培养箱中复氧培养24h；GS+IR组按5μg/ml培养液（最佳药物浓度）加入GS，放入三气培养箱中缺氧培养8h，然后于5%CO2培养箱中复氧培养24h；对照组于5%CO2培养箱中常规培养。采用常规的细胞裂解法（裂解液由8 mol/L尿素，1% TBP，4% CHAPS，0．2% Bio-Lyte组成）裂解细胞，提取全细胞蛋白。Bradford法测定蛋白质含量，双向电泳分离蛋白质。第一向采用pH4-7的固相pH梯度（IPG）等电聚焦，第二向采用浓度为10%的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。银染并经凝胶成像系统采集获得双向电泳图谱，根据IPG胶条的pI线性梯度和标准分子量Marker，确定蛋白质斑点的pI和MW，用ImageMaster2D Platinum v5．0分析软件对实验组和对照组的蛋白质电泳图谱进行差异分析，筛选出10个具有差异表达的蛋白质。切取蛋白质斑点，应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）进行检测，获得各蛋白质的肽指纹图谱，结合2-DE图谱中各蛋白质点的pl和MW值，利用Mascot软件进行匹配检索GenBank数据库来鉴定蛋白质。
结果：①IR组与对照组及人参皂甙+IR组的表达蛋白质组双向电泳图谱相比较存在明显的差异，表现为图谱中蛋白质斑点数目及灰度值的改变。②利用质谱技术和生物信息学技术，鉴定了10个与HK-2缺氧复氧性损伤相关的蛋白质，其中1个为膜蛋白，其余9个为胞浆或胞核蛋白。这些蛋白质的生理功能涉及细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导、抗细胞损伤、细胞骨架等。
结论：①IR组与对照组及人参皂甙+IR组的表达蛋白质组相比较存在明显的差异。②经质谱鉴定和生物信息学分析，确定了10个与HK-2缺氧复氧性损伤相关的蛋白质，为进一步揭示IR发生发展的分子机制提供了实验依据。