成年山羊皮肤干细胞分离与克隆

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本试验研究了山羊类皮肤干细胞分离及体外培养的方法,建立了山羊皮肤干细胞体外分离培养体系,分析了皮肤干细胞的生长特性,并用多种方法对所分离的类皮肤干细胞进行了初步鉴定。结果表明: 1.利用皮肤组织块直接原养、上皮细胞传代、离散细胞原皿培养的方法,均能获得类皮肤干细胞集落,其中组织块直接培养是较理想的方法,它具有可操作性和可重复性。 2.以Tcm199+20%NBS+青霉素+链霉素+盐酸林可霉素+IGF-1为主要成分的培养基,是类皮肤干细胞体外培养的适宜培养基。 3.IGF-1有促进类皮肤干细胞集落形成的作用,当添加剂量为20-35ng/ml时,可使集落出现时间提前1-2d。 4.类皮肤干细胞具有反复传代能力,本试验将所分离的类皮肤干细胞已传至2,3代。 5.山羊类皮肤干细胞在不同细胞饲养层上的生长行为不同,山羊皮肤成纤维细胞饲养层比山羊皮肤上皮细胞饲养层更有利于干细胞集落未分化状态的维持。 6.山羊类皮肤干细胞AKP染色呈阳性反应。 7.山羊类皮肤干细胞体外悬浮培养,能分化出类胚状物。 8.以山羊耳软骨块直接培养形成的条件培养液,可诱导类皮肤干细胞向软骨细胞方向分化。
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