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研究目的：用单直链DNA制备出可靶向到肿瘤细胞的DNA四面体（TD）纳米结构，提高负载药物的抗肿瘤作用；将具有生物活性的SL2B修饰到TD载体上，增强其抗肿瘤作用，载药后同时发挥生物治疗作用及化学治疗作用。体外评价该载药体系的抗肿瘤作用。 研究方法：用四条单直链DNA在体外适宜的条件下自组装成四面体结构，并通过碱基互补配对原则将适配体SL2B和叶酸修饰到TD的顶端，制备出靶向于肿瘤细胞的TD载体；凝胶电泳、红外光谱、原子力显微镜对其结构进行表征；通过优化药物与载体的孵育浓度比和孵育时间，确定最佳孵育条件，并用酶标仪确定TD载药体系的载药量；CCK8法考察TD载药体系对HT-29细胞的增殖抑制作用；倒置荧光显微镜和流式细胞仪分别分析细胞对载药体系的定性和定量摄取，并用激光共聚焦显微镜确定TD载体在细胞内的分布；流式细胞仪考察载体与HT-29细胞作用的凋亡机制和细胞周期机制；CCK8法对SL2B和TD-SL2B体系的生物活性和化学治疗作用进行研究；FITC标记的TD-1SL2B与细胞孵育后，用流式细胞仪测定细胞的荧光强度，通过比较各组Kd值的大小来研究各组SL2B与VEGF165蛋白的结合能力。 研究结果：成功构建出能够靶向到肿瘤细胞的TD载体。载体装载阿霉素后能够显著提高药物的稳定性并缓慢释放药物，每对碱基之间约嵌入3个阿霉素分子，一个TD载体约载入330个阿霉素分子。细胞实验结果显示，所构建的TD载体无细胞毒性，并能够通过核孔进入细胞核内。阿霉素嵌入TD载体后，显著增加了药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用。与游离阿霉素相比，靶向TD载药体系能够显著提高细胞对药物的摄取量，1h时DOX@TD-1S1F和DOX@TD-2S2F的摄取量分别为65.6％和68.0%；与细胞作用48h后，TD载药体系均显著增加了细胞的晚期凋亡率，并通过阻滞细胞周期的S期来抑制细胞的分裂增殖。生物活性研究显示，SL2B修饰到TD上后能够显著提高SL2B对细胞的抑制作用。SL2B浓度为5μM时，TD-1SL2B体系对细胞的抑制率为84.26±1.43%，SL2B浓度为1μM时，TD-1SL2B体系对细胞的抑制率为24.98±0.23%。载入阿霉素后，DOX@TD-1SL2B体系同时显示出对细胞的生物抑制作用和化学治疗作用。结合 力测定结果显示，SL2B与TD结合后显著降低了SL2B与VEGF165蛋白解离常数。 研究结论：本实验所构建的TD载药体系，显著提高了药物的稳定性，并能够将药物有效的递送到肿瘤细胞内，提高药物的抗肿瘤作用。TD-1SL2B载体能够显著降低SL2B发挥生物活性的浓度，在较低浓度时即可抑制肿瘤细胞增殖；载入阿霉素后，该体系可同时发挥生物治疗作用和化学治疗作用。SL2B与TD结合后可能通过提高SL2B的稳定性来增强SL2B与VEGF165的结合能力。靶向TD载药体系及单个SL2B修饰的TD为肿瘤的治疗提供了新方法。