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核桃青皮,作为核桃的一种主要废弃物,含有大量的活性物质,具有十分丰富的营养价值和功能特性,但至今未能很好地被开发利用。核桃青皮酵素是其开发利用方向之一,酵素化妆品是包括酶以及产酶微生物和相关调节因子的一类生物制品,在美白祛斑、脱屑、祛痘、防晒、抗衰老、抗炎等方面发挥多重的化妆品功效。酵素化妆品是近年化妆品领域的热点,发展前景广阔。本文以核桃青皮为原料,通过SOD酶、蛋白酶、抗氧化活性、还原力、总多酚、总酸、还原糖等指标分析,研究核桃青皮酵素的制备工艺;分析发酵前后青皮多酚类物质的变化,以没食子酸为指标成分,研究酵素中没食子酸的透皮吸收特性以及不同促渗剂对没食子酸透皮吸收的影响,同时制备以核桃青皮酵素、核桃油为主要成分的酵素类化妆品,为核桃青皮的开发利用及研究化妆品中多酚类物质的透皮吸收奠定基础。主要研究内容和结果如下:1、核桃青皮酵素的制备工艺以菌种和加糖量为变量,检测核桃青皮发酵过程中的SOD酶、蛋白酶、抗氧化活性、还原力、总多酚、总酸、还原糖等指标,结果表明固态发酵各项指标明显高于液态发酵,菌种不同时,DPPH清除率和总酸无明显差异,乳酸菌发酵对羟自由基的清除率最高,混合菌种发酵的还原力和总多酚最高;加糖量不同时,DPPH清除率无明显差异,加糖量为10%时,SOD酶、蛋白酶、超氧自由基清除率、总多酚、还原力、总酸各项指标最好,加糖量为30%时羟自由基清除率最高,加糖量为40%时还原糖含量最高;因此将固态发酵、加糖量为10%、混合菌种发酵选为最优发酵工艺。同时对大理核桃、漾濞大泡、圆菠萝和娘青四个品种的核桃青皮酵素进行比较,结果显示DPPH自由基清除率无明显差异,圆菠萝羟自由基清除率和还原糖含量最高,漾濞大泡的羟自由基清除率与圆菠萝相差无几,漾濞大泡的还原力和总多酚含量最高,并且对DPPH自由基有很强的清除能力,是比较好的核桃青皮发酵品种。2、核桃青皮发酵前后多酚类物质的变化采用LC-MS鉴定核桃青皮以及核桃青皮酵素中的多酚类物质,从核桃青皮中分离出18种物质,其中没食子酸含量最高(35.02%),其次是对香豆酸(8.26%)。从核桃青皮酵素中共分离出10种物质,其中含量最高的为山梨酸(26.48%),3,5-二羟基-2-甲基-4H-吡喃-4-酮(15.63%),其次是没食子酸(5.53%),通过对比可以看出,没食子酸、绿原酸、二氢红花菜豆酸-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷这三种成分是发酵前后共同存在的物质,发酵以后没食子酸含量降低,主要增加了山梨酸、3,5-二羟基-2-甲基-4H-吡喃-4-酮两种物质,同时可以看出没食子酸是核桃青皮中主要的多酚类物质。3、没食子酸透皮吸收的研究采用改良的Franz扩散池法,以离体小鼠腹部皮肤为透皮屏障,以生理盐水为接受介质,对核桃青皮酵素中没食子酸的体外透皮吸收进行研究,同时探讨不同促渗剂及浓度对没食子酸体外透皮吸收的影响,确定最佳促渗剂及浓度。没食子酸累积透过量Q与时间12h内呈现出良好的线性关系,r2为0.9986,透皮稳态速率J为17.639μg/cm2·h,24h累积透过率为68.2%,说明核桃青皮酵素液中没食子酸具有很强的透皮能力。促渗剂薄荷醇组、丙二醇组均能促进没食子酸的体外透皮吸收,不同促渗剂的促渗效果为2.5%薄荷醇>1.5%薄荷醇>0.5%薄荷醇>2%丙二醇>5%丙二醇>10%丙二醇,促渗效果最强的为2.5%的薄荷醇,由Q-t方程可以看出,相较于薄荷醇组来说,丙二醇组的线性关系更好,说明丙二醇的促渗效果更稳定,综合上述结论,选择2.5%的薄荷醇为没食子酸透皮吸收的最佳促渗剂。4、酵素化妆品的制备以核桃青皮酵素中的多酚物质为主要有效成分,利用天然的橄榄油、荷荷巴油,添加透明质酸钠、甘油等保湿成分和尿囊素、生育酚等营养成分,以单硬脂酸甘油酯和硬脂酸为乳化剂,卡波姆为增稠剂,尼泊金甲酯和杰马抗菌剂为防腐剂,添加少量玫瑰纯露、洋甘菊纯露或绿茶香精,试制了核桃青皮酵素面霜、乳液、凝胶、爽肤水,并进行了相应的效果评价实验。结果表明试制的核桃青皮酵素化妆品各项指标均符合产品要求,同时对稀释后的护肤品溶液进行DPPH自由基清除率的检测,检测结果显示,不同剂型护肤品对DPPH自由基清除率为:润肤乳>食品级润肤乳>面霜>爽肤水>凝胶,说明核桃青皮酵素护肤品很有可能是安全有效的抗氧化及保湿类护肤品。