儿茶素酶促低聚反应的初步研究和红茶酯提取物的分离及活性分析

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 5次 | 上传用户:wushong
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儿茶素低聚合物具有良好的生物活性如抗动脉粥样硬化、防止皮肤癌等,有些活性甚至高于儿茶素单体,其形成条件和途径比较复杂。本试验以儿茶素的消耗量和茶黄素的生成量为评价指标,结合反应前后体系对紫外可见光的吸收变化及HPLC/MS的分子量信息,确定以下酶促低聚反应体系:温度20℃,反应底物50mg,缓冲液(pH=5.0的磷酸缓冲液与丙酮按体积比为1:10)11ml,辣根过氧化物酶0.8mg,H2O2(3%v/v)0.3ml,磁力搅拌转速为700rpm,反应1h,pH=1.87的柠檬酸2ml终止反应。筛选8组反应底物采用此酶促低聚体系进行反应,除生成结构已经明确的茶黄素类衍生物,底物还聚合或分解产生分子量在200~1200之间、聚合度在五以内的低聚合物,其理化性质及结构有待进一步鉴定。 对红茶乙酸乙酯提取物进行分离纯化及活性研究。结果发现,结合柱层析、分析型HPLC及制备型HPLC可对大吉岭红茶酯层提取物进行有效地分离分析,得到7个峰组分,并从峰3中分离出两种黄酮甙的混合物,HPLC/MS及NMR确认为槲皮素-3-βD-葡萄糖甙及槲皮素-3-β-D-半乳糖甙;采用表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、茶多酚(TP)、茶黄素(TF)、茶黄素单没食子酸酯(TFMG)、茶黄素双没食子酸酯(TFDG)作为对照,对红茶酯提取物的分离组分进行总抗氧化、清除OH·、O2-·、和DPPH·活性试验,并采用SAS软件进行差异显著性比较。结果表明,红茶提取物中儿茶素单体和低聚物的活性要高于高聚物,从而为筛选高活性红茶组分提供基础。
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