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目的：建立灵敏、专属、快速的HPLC-MS/MS法,同时分析血浆中卡培他滨及其代谢物,并用于临床前药物动力学研究。方法：测定5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸、卡培他滨、5’-脱氧-5-氟胞苷、5’-脱氧-5-氟尿苷的血药浓度时,50μL血浆样品经蛋白沉淀处理后,上清液在40℃条件下经过氮气吹干,用水-0.1%甲酸复溶,以水-0.1%甲酸为水相,甲醇-0.1%甲酸为有机相,流速为0.8mL/min,菲罗门Luna PFP(50×4.6mm,3μm)色谱柱进行梯度洗脱分离。采用API-4000型三重四级杆串联质谱仪,电喷雾电离源(ESI),选择反应监测(SRM),负离子方式检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z129.1→m/z42.1(5-氟尿嘧啶),m/z261.1→m/z171.1(5-氟尿嘧啶核昔),m/z245.3→m/z155.1(5-氟去氧尿苷),m/z325.1→m/z129.1(5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸),m/z358.2→m/z153.9(卡培他滨),m/z244.1→m/z128.1(5’-脱氧-5-氟胞苷),m/z245.1→m/z129.0(5’-脱氧-5-氟尿苷)和m/z145.1→m/z42.1(内标,5-氯尿嘧啶)。结果：本方法测定5-氟尿嘧啶的定量范围为10.0-1000ng/mL5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸、卡培他滨、5’-脱氧-5-氟尿苷的定量范围为5.00-1000ng/mL；5’-脱氧-5-氟胞苷的定量范围为20.0-1000ng/mL。测定5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶核苷、5-氟去氧尿苷、5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸、卡培他滨、5’-脱氧-5-氟胞苷、5’-脱氧-5-氟尿苷在人血浆中的日内、日间精密度(RSD)分别小于9.3%,5.7%,7.4%,6.9%,8.2%,11.3%,10.8%。测定准确度(RE)分别在-4.2%-4.8%,-0.6%-5.9%,0.5%-5.5%,-1.3%-8.0%,-3.8%-6.7%,0.8%～5.4%,-3.2%～4.1%范围内。测定上述化合物在大鼠血浆中的日内、日间精密度(RSD)分别小于11.6%,10.7%,10.2%,10.6%,7.9%,8.8%,9.8%。测定准确度(RE)分别在-3.2%--2.1%,1.6%-4.3%,-3.1%-2.8%,-2.1%-5.2%,-2.7%～5.7%,1.8%～1.9%,4.9%～7.5%范围内。结论：所建立的HPLC-MS/MS法灵敏、专属、快速,可用于卡培他滨及其代谢物的血药浓度的测定和临床前药物动力学研究,为临床药物动力学研究提供参考。