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禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒引起的家禽或野禽的一种感染和/或疾病综合征。人禽流感（human avian influenza,HAI）是人接触被禽流感病毒污染的排泄物、分泌物或气溶胶而感染,并出现以呼吸道感染、黏膜充血等为主要表现的人禽共患病,部分感染高致病性禽流感毒株的患者可出现呼吸衰竭和多器官损害,死亡率高。禽流感已被国际兽医局列为A类烈性传染病。禽流感历来被认为是人类流感的最大基因库,是人流感病毒发生变异的新基因来源,近年来禽流感病毒正在世界多个国家传播,已对人类健康构成了很大的威胁。据世界卫生组织统计,目前,全球共有15个国家405人感染了高致病性禽流感病毒,其中94人死亡,我国至今发生38例人感染高致病性禽流感。禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）从禽类感染人已被证实,但目前还无充分证据证实禽流感病毒从人到人的感染。禽流感病毒为什么能感染人并对人具有致死性仍是研究人员在深入探讨的问题。禽流感病毒能逃避人体免疫系统的识别,但其具体机制仍不清楚。已有人源或禽源禽流感病毒引起不同鸟类、大小鼠、猪、家猫、雪貂和非人灵长类动物致病性的研究报道,但从实用性考虑,小鼠有体形小、品系多、易获得、操作方便、对禽流感较敏感等突出优点,小鼠将成为研究禽流感病毒感染哺乳动物发病机制的重要实验动物。面对禽流感病毒抗原的不断漂移与变异,面对禽流感病毒对禽类和人类构成的严重威胁,面对禽流感病毒直接感染人,最终将出现人传人的现象。我们有必要建立实验动物模型并开展禽流感病毒的基础性和预防性研究,掌握禽流感病毒的病原特性、致病机理及防治措施。目前,西药防治禽流感病毒主要是通过切断病毒复制或传播的途径来进行治疗,其主要不足是金刚烷胺口服时生物利用度太低,“达菲”易产生严重副作用,病毒唑有致畸性。疫苗防治禽流感病毒主要是利用灭活病毒或病毒的免疫原使机体产生相应抗体,抵抗同类型病毒的感染。主要不足是由于病毒抗原的多变性,加上受禽类的种类、年龄、性别、并发感染、所感染毒株的毒力和其它环境因素变化的影响,无论传统灭活疫苗和弱毒苗,还是基因工程疫苗和核酸疫苗,都不能对所有禽流感病毒实现交叉保护,很多免疫过的鸡群还会爆发禽流感。中医强调“辩证论治”和“预防胜于治疗”的原则。中药的防治策略是扶正祛邪或祛邪扶正。中药防治的主要优势是中药含有多种活性成分,对病毒的杀灭作用机制多样,同时还具有免疫调节作用,可改善和提高机体的免疫功能,因而中药对多种病毒有效,对病毒的防治作用明显。因此,加强中药预防和治疗禽流感的研究是弥补生物医药、化学药（西药）治疗缺陷的有效方法。根据人禽流感主要发生在冬春季节和引起急性呼吸道症状等特点,将其归属于中医瘟疫中的时行感冒范畴。预实验提示:禽流感病毒感染小鼠后,病邪由表入里迅速传变,病情急骤,发热过程不明显。因此,我们在经过很多中药复方的预试后,选择了对体温、免疫、胃肠道等功能具有双向调节功能的桂枝汤,治疗胃肠型感冒和暑瘟的藿香正气散,治疗风热感冒初期的桑菊饮三种中药复方对禽流感病毒动物模型进行干预研究。目的:本论文将比较禽流感病毒对多种实验动物的致病敏感性,利用最敏感的实验动物建立禽流感病毒疾病动物模型,在建立模型指标的基础上,开展中药复方对禽流感病毒的干预研究。方法:本论文第二部分共四个实验。实验一、按Reed和Muench氏法测定禽流感病毒对BALB/c小鼠的LD50。实验二、麻醉后,对SPF级KM小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠、BALB/c小鼠和清洁级F344大鼠、SD大鼠、沙鼠接毒,。每20g动物接种100μL禽流感病毒原液,用移液枪滴入接毒组大小鼠、沙鼠鼻腔。通过“环甲膜穿刺术”经气管注射2mL禽流感病毒感染兔。观察临床症状、体温变化、体质量变化、死亡情况、病理改变等指标。比较禽流感病毒对各实验动物的致病敏感性。实验三、将100μL禽流感病毒原液用移液枪滴入30只BALB/c小鼠鼻腔,另30只对照组接种正常鸡胚尿囊液。观察临床症状、体温变化、体质量变化、死亡情况、病理改变等。实验四、将110只BALB/c小鼠分为6组:藿香正气散组（灌胃藿香正气散26.4g/kg）、桂枝汤组（灌胃桂枝汤15.6g/kg）、桑菊饮组（灌胃桑菊饮34.4g/kg）、病毒唑组（灌胃病毒唑70mg/kg）、模型对照组（灌胃0.4mL生理盐水）,每组小鼠20只,鸡胚尿囊液对照组（灌胃0.4mL生理盐水）10只,各组小鼠均为雌雄各半。接毒前2天,各组小鼠每天灌胃不同类型的治疗方药,接毒当天上午给药,下午对藿香正气散组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组和模型对照组接种100μL禽流感病毒原液。接毒后,再给药2天。尿囊液对照组在接毒当天接种100μL鸡胚尿囊液,再灌胃0.4mL生理盐水2天。以小鼠体温、体质量、存活时间、死亡保护率、食料消耗量为观察指标。结果:实验一、禽流感病毒感染BALB/c小鼠的LD50为10-0.375/0.1mL。实验二、本实验研究了禽流感病毒对8种不同实验动物的致病敏感性,结果显示KM、NIH、ICR、BABL/c等小鼠和沙鼠均不同程度的复制出了禽流感病毒感染后的临床特点。首先,有不同的潜伏期,KM小鼠的潜伏期长,而BABL/c小鼠的潜伏期最短,发病急。第二,不同品系小鼠在禽流感病毒感染后,其临床症状轻重表现不一、死亡率及死亡高峰出现时间也存在差别,禽流感病毒对于不同品系小鼠的致病性是不同的。BABL/c、ICR和NIH小鼠有一个可观察到的疾病发生发展过程,临床症状严重的动物出现接近半数或半数以上的死亡,另一部分好转痊愈,有助于模型评价。KM小鼠感染禽流感病毒后只出现轻微的临床表现,体温、体质量出现一过性的下降后,迅速恢复正常;SD和F344大鼠感染禽流感病毒后没有出现感染表现,未分离到病毒;兔感染禽流感病毒后仅观察到轻度体温变化和肺脏病理变化,未分离到病毒,因此,KM小鼠、大鼠和兔不适合制作禽流感病毒动物模型。从实验结果的统计分析可以看出,KM、NIH、ICR、BABL/c小鼠和F344、SD大鼠,沙鼠在接毒后都出现体温下降,而且与尿囊液对照组相比,体温下降幅度有统计学差异,BALB/c小鼠体温降低最显著。KM、NIH、ICR、BABL/c小鼠和沙鼠在接毒后都出现体质量减轻,与尿囊液对照组相比,都有统计学意义。不同品系的小鼠和沙鼠感染禽流感病毒后出现不同的死亡率,禽流感病毒感染BABL/c小鼠的死亡率最高,其次是沙鼠,再次是ICR小鼠,NIH小鼠死亡率较低,KM小鼠有10%的死亡率,大鼠不出现死亡。这说明禽流感病毒对于小鼠和沙鼠有致病性,而且,上述实验动物的死亡率有统计学差异。与禽流感BALB/c小鼠高死亡率对应,病理变化结果也是BALB/c小鼠最严重。在被感染动物体内分离出同种病毒是病毒感染动物模型成模的重要指标,本实验能在禽流感病毒感染后死亡的KM、NIH、ICR、BABL/c小鼠和沙鼠的肺脏分离到病毒,证实以上临床症状确实是由于禽流感病毒感染机体所致。而在禽流感病毒感染大鼠和兔的脏器没有分离到病毒,这也反证了禽流感病毒感染导致小鼠和沙鼠的发病死亡。综上所述,禽流感病毒对不同实验动物有不同的致病性,BABL/c小鼠的致病敏感性最强,其临床症状、体温变化、体质量变化、死亡率、病理变化最明显。实验三、实验结果显示,禽流感病毒感染BABL/c小鼠已具备了禽流感病毒引起小鼠肺等多个脏器炎症病理、发生大量死亡、康复小鼠产生抗体的完整的传染病发生发展和恢复的过程,能成为研究禽流感病毒的较好动物模型。现将本实验在临床特征、体温变化、体质量变化、死亡率、脏器指数、病毒复制6个方面建立的模型指标综述如下:①临床特征:禽流感病毒感染BALB/c小鼠后的病程主要表现为潜伏期、发病期和恢复期。具体临床特征表现为潜伏期短、急性起病、出现呼吸道症状,继而病情发展迅速、出现肺炎、多器官功能衰竭、死亡。在发病期肺脏出现严重的出血、水肿、坏死等病变,肺内导管上皮细胞变性、坏死、脱落,并有充血和大量炎性细胞浸润,肺泡中有大量出血和炎性细胞浸润,有的肺泡融合呈气肿状,有的肺泡实变塌陷,肺间质严重充血、水肿伴有大量炎性细胞浸润。②体温变化:BABL/c小鼠感染禽流感病毒后体温出现下降过程。③体质量变化:BABL/c小鼠感染禽流感病毒后体质量出现减轻。④脏器指数:感染禽流感病毒后,BABL/c小鼠的肺和肝指数增高。⑤死亡率:感染禽流感病毒后,BABL/c小鼠的死亡率较高。⑥病毒复制:在禽流感病毒感染BABL/c小鼠的肺、心、肝、脾中分离到病毒,而且从肺脏分离病毒的比率较其它器官高,说明禽流感病毒以小鼠肺脏为靶器官,以肺巨噬细胞和气管上皮细胞为其靶细胞。在康复小鼠体内检出抗体。禽流感病毒感染BABL/c小鼠疾病动物模型的建立,使我们可以利用稳定的、遗传背景清晰、易获得的小型哺乳类近交系实验动物来观察禽流感病毒的发病机制和药物疗效等。实验四、藿香正气散对禽流感病毒感染小鼠的体温保护效果最明显,其次是桂枝汤组和桑菊饮组,病毒唑组对体温无保护作用。中西药治疗组的小鼠体重下降均比模型对照组慢,藿香正气散组、桂枝汤组在感染禽流感病毒的第5-6天小鼠恢复进食,表明藿香正气散、桂枝汤具有恢复胃气的功能,以桂枝汤恢复胃气的作用最佳。脾胃乃后天之本,胃气包括了消化功能、全身健康营养状况、机体的代偿功能和免疫功能等。人体的五脏六腑皆“禀气于胃”,胃气能养五脏之气;而百病皆由“胃气衰而生”;“胃气不伤,百病皆愈;胃气一败,百药难施”之说。因此,藿香正气散、桂枝汤调节了感染禽流感病毒小鼠下降的体温,同时固护胃气,增强了小鼠的抗病毒的能力。藿香正气散和桂枝汤能使感染禽流感病毒小鼠较快恢复健康和食欲,与藿香正气散组、桂枝汤组小鼠体质量下降缓慢相符合。经统计学检验,藿香正气散组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组之间死亡保护率有显著性差异,死亡保护率由高到低排序,依次是桂枝汤组＞藿香正气散组＞桑菊饮组＞病毒唑组。藿香正气散组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组肺指数抑制率均为正值,表明给药组动物的肺病变程度比模型组轻,但以中药治疗组减轻肺脏病变疗效较西药佳,表明藿香正气散组、桂枝汤组等有对抗禽流感病毒的作用和保护小鼠机能的作用。结论:第一,研究探讨了禽流感病毒对8种不同实验动物的致病敏感性,结果显示,BALB/c小鼠的致病敏感性最强,其临床症状、体温变化、死亡率、病理变化都是最明显的,其它品系小鼠也表现一定致病性,禽流感病毒对大鼠和兔未表现临床症状。第二,研究探讨了禽流感病毒感染BALB/c小鼠疾病动物模型的建立。研究和掌握了禽流感病毒小鼠模型在临床特征、体温变化、体质量变化、死亡率、脏器指数、病毒复制6个方面稳定的模型指标。禽流感病毒感染BALB/c小鼠疾病动物模型及模型指标的建立,使我们可以利用稳定的、遗传背景清晰、易获得的小型哺乳类近交系实验动物来观察禽流感病毒的发病机制和药物疗效等。第三,研究探讨了中药复方对禽流感病毒的干预作用,结果表明:①藿香正气散、桂枝汤对禽流感病毒感染小鼠所致体温降低具有升温作用;②桂枝汤、藿香正气散能提高禽流感病毒感染小鼠的体质量;③桂枝汤、藿香正气散能提高禽流感病毒感染小鼠的死亡保护率;④藿香正气散、桂枝汤对禽流感病毒感染小鼠的肺指数有抑制作用;⑤桂枝汤、藿香正气散具有调节胃肠和恢复胃气的功能。