RBM10在肺腺癌中表达与临床特征相关性分析

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目前,在所有恶性肿瘤中,肺癌是造成人类死亡的首要原因,每年有超过100万人因此死亡。截至2016年,美国有224,390例肺癌被诊断,其中死亡158,080例,现今社会,无论在发达国家还是发展中国家,肺癌均已严重威胁人类健康。尽管近年来肺癌诊断方法、治疗手段有较快发展,然而由于肺癌早期症状不明显,肿瘤在早期即发生进展,导致肺癌患者的预后无改善,目前5年总生存率在15%左右,不容乐观。有研究显示,80%的患者所患肺癌的病理类型为非小细胞肺癌,而肺腺癌是非小细胞肺癌主要的组织类型之一。以往肺腺癌的治疗手段是以铂类药物为基础的化疗,但由于肺腺癌对化疗不敏感及耐药的产生导致治疗效果不佳。而随着研究人员对基因组学和分子生物学的探索,人们对肺腺癌的形成与侵袭、迁移机制有了新的发现,重新审视了非小细胞肺癌的治疗方法。研究发现,大多数肺腺癌患者存在表皮生长因子受体(EGFR)的突变,这也使新型治疗手段——分子靶向治疗受到了临床医生以及科研人员的重视,而其中表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)已经成为治疗肺腺癌的关键手段,一部分经过EGFR-TKI治疗的患者,预后已明显改善。但是由于肺腺癌不断出现相关基因的二次突变、扩增以及旁路的激活,导致经过12个月  EGFR-TKI治疗后的患者相继出现耐药,因此,在分子靶向药物治疗上我们又面临着新的挑战,需要寻求新的策略来治疗大多数的肺腺癌。近几年来RNA结合蛋白(RBM)逐渐走入研究视野,其中RBM10与RBM5,能够调节凋亡相关基因。在肺腺癌A549细胞中,Western Blot检测到RBM5表达下降,而RBM10却是上升的,RBM5是已知的抑癌基因,由此我们推测,RBM10是否是潜在的致癌基因。RBM10作为一项新的潜在的与肿瘤相关的生物标志物,是否可以为我们在肺腺癌的早期诊断、靶向药物治疗上以及预测疗效上提供新的手段与策略有待研究。  目的:  本研究拟通过免疫组化检测RBM10在肺腺癌组织中的表达及与临床特征的相关性以及肺腺癌的体外实验,为RBM10可否成为临床上肺腺癌突变基因检测的标志性基因以及成为临床治疗肺腺癌的新靶点进行初步讨论研究  方法:  1、将RBM10-siRNA转染染肺腺癌A549细胞,获得稳定低表达细胞株。通过肺腺癌的体外实验:免疫荧光及Western Blot检测RBM10在肺腺癌A549细胞中表达情况,实验分三组:Normal组、siRBM10组及Mock组。  2、通过免疫组化及Western Blot方法检测RBM10在肺腺癌组织中的表达情况与临床特征(性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、TNM分期)的相关性进行综合分析。结果:  1、免疫荧光检测发现RBM10表达于在肺腺癌A549细胞细胞核及胞浆。Western Blot检测发现Normal组与Mock组表达中等量RBM10,两组RBM10蛋白的表达量几乎相等,siRBM10组表达RBM10较其他两组明显减少。  2、免疫组化显示,癌组织较癌旁组织,细胞核明显增大且深染,RBM10表达于细胞核及胞浆。与癌旁组织相比,Western Blot检测肺腺癌中RBM10蛋白显著增多。  3、对45例肺腺癌组织和相应癌旁正常组织标本中RBM10蛋白的表达,其中33例癌组织标本中有明显RBM10表达,其癌旁正常组织中几乎表达缺失,4例癌组织中无RBM10表达而其相应的癌旁组织中有RBM10表达,10例肺腺癌组织和相应癌旁组织RBM10均几乎不表达。RBM10蛋白在肿瘤组织中表达升高,与性别、年龄吸烟,淋巴结转移无关,而与肿瘤TNM分期有相关性(p<0.05)  结论:  1、RBM10表达于细胞核与胞浆,与RBM10自身的功能有关,RBM10能与RNA结合,参与mRNA的剪接、翻译和稳定性。体外RBM10-siRNA转染肺腺癌A549细胞,成功转染的A549,siRBM10组细胞表达RBM10较Normal组与Mock组明显减少,这提示RBM10蛋白表达增加与肺腺癌的发生、发展有关。  2、肺腺癌组织中RBM10表达增加,在癌旁组织中几乎无表达甚至缺失。RBM10在肺腺癌组织中表达增加,与患者的年龄、吸烟史及淋巴结转移无相关性,与TMN分期有相关性。
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