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背景及目的:甲状腺癌(Thyroid cancer,TC)是人类内分泌系统最常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%,且其发病率逐年升高,是近年来发病率上升最快的恶性肿瘤之一。尽管大多数甲状腺癌患者预后良好,但常规治疗(切除联合放射碘消融和甲状腺激素治疗)可使约10%-15%的患者术后出现难治性的并发症,而且转移性滤泡细胞来源的甲状腺癌患者对放化疗无效,其10年生存期仅为40-50%。另外,甲状腺未分化癌更为致命,目前暂时没有有效的全身性治疗手段,严重危害人类健康。因此了解TC的分子机制显得尤为重要。本研究主要通过以下内容阐述TC的分子机制:1、从临床角度分析TRIP13在甲状腺癌中表达情况及其与其它基因的相关性研究;2、沉默TRIP13基因后观察对甲状腺癌细胞增殖、周期、凋亡及侵袭迁移能力的影响;3、分析TRIP13对下游TTC5/p53信号通路的调节及作用机制,最终明确TRIP13通过TTC5/p53信号通路对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法:1.收集100例手术切除的甲状腺癌组织和癌旁组织标本,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测癌和癌旁TRIP13、TTC5/p53、E-cadherin、N-cadherin的mRNA表达水平,免疫组化检测TRIP13、TTC5/p53、E-cadherin、N-cadherin蛋白在甲状腺癌组织及癌旁组织中表达量的差异;实时定量PCR检测不同甲状腺癌细胞株的TRIP13 mRNA表达水平,Western blot检测不同甲状腺癌细胞株中的TRIP13的蛋白表达水平。2.选择TRIP13表达量较高的甲状腺癌细胞株,构建并筛选TRIP13干扰片段,实时荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果;筛选干扰效果最佳的片段后转染甲状腺癌细胞,CCK8检测沉默TRIP13后对甲状腺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测沉默TRIP13后对甲状腺癌细胞周期及凋亡的影响;细胞划痕实验及Transwell检测沉默TRIP13后对甲状腺癌细胞侵袭及迁移能力的变化。3.实时定量PCR检测沉默TRIP13后TTC5/p53、E-cadherin、N-cadherinmRNA的变化,Western blot检测检测沉默TRIP13后TTC5/p53、E-cadherin、N-cadherin蛋白的变化,并通过回复实验明确TTC5/p53信号通路是TRIP13影响甲状腺癌细胞生物学功能的关键分子。结果:1)与癌旁组织相比较,甲状腺癌组织中的TRIP13和N-cadherin蛋白及mRNA表达水平明显升高,TTC5、p-p53和E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。另外,在C643、BHT101及TPC1三株甲状腺癌细胞株中,qRT-PCR与Western blot结果显示,与C643甲状腺癌细胞相比,TPC1和BHT101中TRIP13的mRNA及蛋白表达水平都明显更高,差异具有统计学意义,因此选择TPC1和BHT101用于后续的干扰实验(P<0.05)。2)在TPC1和BHT101细胞系中沉默TRIP13的表达后,CCK8结果显示,与对照组相比,24小时和48小时沉默组的细胞增殖能力都明显下降;流式细胞术结果显示,沉默TRIP13后S期明显升高,G2期明显下降,细胞凋亡也明显增加;差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕及Transwell实验结果显示,沉默TRIP13后甲状腺癌细胞侵袭及迁移能力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。3)在TPC1和BHT101细胞系中,与对照组相比,沉默TRIP13后TTC5和E-cadherin表达明显升高,N-cadherin表达明显下降,另外p-p53表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。并且抑制TTC5的表达后可以挽救TRIP13降低导致的TPC1和BHT101甲状腺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力被抑制。结论:TRIP13在甲状腺癌组织及细胞中高表达,TRIP13通过TTC5/p53信号通路影响甲状腺癌的增殖、侵袭迁移、周期及凋亡能力,为甲状腺癌的分子治疗提供新的靶点。