【摘 要】
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整合素在动物细胞信号传导、细胞黏附、细胞运动等过程中起着重要作用,与人类很多的疾病相关,如在癌症的病理进程中与癌细胞的运动和扩散有紧密的关系。在植物和微生物体内也存在着与动物整合素相似的类整合素蛋白。在本实验室的前期研究工作中通过蛋白质组学技术,在OsiSh-2中鉴定到一种类整合素蛋白（Integrin-like protein,ILP）,该蛋白质可能与OsiSh-2响应稻瘟病菌的刺激相关。本论文
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整合素在动物细胞信号传导、细胞黏附、细胞运动等过程中起着重要作用,与人类很多的疾病相关,如在癌症的病理进程中与癌细胞的运动和扩散有紧密的关系。在植物和微生物体内也存在着与动物整合素相似的类整合素蛋白。在本实验室的前期研究工作中通过蛋白质组学技术,在OsiSh-2中鉴定到一种类整合素蛋白（Integrin-like protein,ILP）,该蛋白质可能与OsiSh-2响应稻瘟病菌的刺激相关。本论文在此基础上,将类整合素蛋白作为研究对象,通过Pull-Down技术并联合使用质谱从OsiSh-2总蛋白中筛选并鉴定与该蛋白具有相互作用的蛋白质,探讨类整合素蛋白在OsiSh-2体内可能发挥的功能,有关结果如下:1.OsiSh-2的类整合素蛋白鉴定。通过生物信息学分析,发现ILP2蛋白为一种胞外区域大、胞内区域小的非对称膜蛋白,具有典型的跨膜结构域。同时,ILP2蛋白还具有整合素蛋白的两种特殊功能结构域:FG-GAP重复序列及4个整合素α结构域。这些结果说明ILP2蛋白无论是在结构特征上还是所具有的功能结构域方面都与整合素十分相似,为一种存在于链霉菌OsiSh-2的类整合素蛋白。2.ILP2蛋白相互作用蛋白的筛选。通过Pull-Down及质谱从OsiSh-2总蛋白中鉴定并筛选出了71种与ILP2蛋白具有相互作用的蛋白质,这些蛋白质参与了众多的生理过程,如基因调控、细胞信号传导、环境调控、碳代谢等,说明ILP2蛋白可能与OsiSh-2体内众多的生理过程有关,并对这些过程产生影响或起着调控作用。3.ILP2蛋白与AraC转录调控因子及四氢嘧啶合成酶（EctC）之间相互作用关系的确认。通过GST Pull-Down实验证明了ILP2蛋白与AraC及EctC1之间具有直接的互作关系,AraC蛋白与EctC1及EctC2之间存在着直接的互作关系,而ILP2蛋白与EctC2之间则可能是通过AraC为桥梁,存在着间接的关系。4.ILP2基因过表达对OsiSh-2生理化特性的影响。通过接合转移技术将ILP2基因在OsiSh-2体内成功的进行了过表达。结果发现ILP2基因的过表达:（1）改变了OsiSh-2菌丝体形态并影响其产生色素的能力;（2）影响了OsiSh-2菌株生产和积累四氢嘧啶的能力,致使OsiSh-2对NaCl的耐受能力降低,这可能与ILP2蛋白对EctC的影响有关;（3）对稻瘟病菌的拮抗能力几乎完全消失,这可能是因为ILP2基因的过表达对与ILP2蛋白存在相互作用关系且和抗生素的合成有关的转录调控因子产生了影响。总之,类整合素蛋白ILP2在OsiSh-2体内具有重要的作用,与菌株的多种生物过程有着联系。本研究是在链霉菌研究领域中首次对存在于链霉菌的类整合素蛋白进行了较为详细的研究,揭示了类整合素蛋白ILP2的部分功能。这对于作为具有巨大生防菌潜力的OsiSh-2的开发和利用具有重要意义并为后续的研究提供了线索和依据。
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