0.3%透明质酸钠对单纯环境因素干眼小鼠预防和治疗作用

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目的:比较0.1%透明质酸钠滴眼液和0.3%透明质酸钠滴眼液对于单纯环境因素诱导的干眼模型小鼠的治疗和预防作用及其安全性,探讨高浓度透明质酸钠滴眼液对于干眼治疗的效果。  方法:本研究通过智能环境控制系统(Intelligent Controlled Environmental System,ICES)调控实验动物饲养环境的湿度、温度以及气流,诱导C57BL/6小鼠产生类似人类单纯环境因素干眼的眼表改变。实验设有两个治疗组以及三个对照组,分别为:0.1%透明质酸钠治疗组(A组);0.3%透明质酸钠治疗组(B组);磷酸盐缓冲液(PBS组);未接受任何治疗饲养于ICES饲养箱(ICES组);未接受任何治疗饲养于正常环境(NT)。两种方案均采用双眼给药,一天4次。研究选用两种方案:实验组小鼠放入ICES饲养箱即开始双眼给药,直至第14天(方案1,S1),评估不同浓度透明质酸钠对于干眼的预防作用;实验组小鼠放入ICES饲养箱造模14天后开始双眼给药,持续至第28天(方案2,S2),评估不同浓度透明质酸钠对于干眼的治疗作用。通过荧光素钠染色裂隙灯观察角膜上皮完整性、过碘酸雪夫染色(Periodic acid-schiff stain,PAS)观察结膜杯状细胞形态密度并计数结膜杯状细胞数目、免疫荧光染色方法(TUNEL or Caspase-3)检测角膜上皮细胞凋亡并计数、qRT-PCR检测结膜炎症因子白介素-1β(Interleukin-1,IL-1β),白介素-6,(Interleukin-6,IL-6),白介素-17(Interleukin-17,IL-17),白介素-23(Interleukin-23,IL-23)及肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factors-α,TNF-α)的表达情况。  结果:方案1与方案2中A组和B组(8.0±1.3,9.0±1.7;6.0±1.4,8.0±2.2)角膜荧光素钠染色评分明显低于PBS组和ICES组(11.0±2.6,15.0±2.6;13.2±2.26,15.0±2.8;P<0.001)。PAS试验结果显示,A组和B组结膜杯状细胞形态以及数目更接近正常组(NT),而PBS组和ICES组结膜杯状体积明显缩小,结膜杯状细胞数量减少,与治疗组之间存在统计学差异(P<0.001)。方案1与方案2中A组结膜杯状细胞数目下降更加明显,与B组结膜杯状细胞计数之间差异有统计学意义(112±3,85±3;169±4,140±4; P<0.001)。与NT相比,角膜Caspase-3荧光染色强度均表现出升高趋势。角膜Caspase-3荧光染色强度在A组和B组显著低于PBS组和ICES组。透明质酸钠治疗组TUNEL角膜凋亡细胞计数显著降低。方案1显示,B组眼表凋亡细胞少于A组(4.4±0.8,2.2±0.8;P<0.001),与治疗组相比,PBS组和ICES组凋亡细胞计数显著增加(5.6±1.2,8.2±1.9; P<0.001)。与其他实验组相比,A组和B组的结膜炎症因子IL-1β,IL-6,IL-17,IL-23,TNF-α表达水平降低。方案2中B组IL-1β的表达降低更加明显,与A组之间存在统计学差异(P<0.05)。两种方案检测的各项指标表现出相同趋势。  结论:0.1%透明质酸钠滴眼液和0.3%透明质酸钠滴眼液对于单纯环境因素诱导的干眼小鼠均有一定的预防和治疗作用,高浓度透明质酸钠滴眼液对于干眼的治疗效果更加显著。
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