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目的:通过网络药理学和生物信息学方法探讨脑舒明方抗脑缺血损伤的分子机制,并对其进行实验验证。方法:1.运用R语言以及Perl软件,通过TCMSP、GEO、Drugbank等数据库挖掘脑舒明方的活性成分与预测靶点,以及脑缺血的相关靶点基因,得到药物-疾病的活性成分及关键作用基因。通过Cytoscape软件与String数据库构建活性成分-靶点网络及作用蛋白互作网络。对作用基因进行基因本体分析及京都基因与基因组百科全书通路富集分析。发现脑舒明方可能通过抑制炎症反应的方式发挥抗脑缺血损伤的作用。2.采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制大鼠脑缺血模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、脑舒明低、中、高剂量组,另设正常组及假手术组。每组别分别于造模后3d、7 d、14 d处死检测相关指标,参照Longa5分评分法进行神经功能评分,免疫组化检测NF-κB/p50、NF-κB/p65、TNF-α、IL-1β 的蛋白表达,实时荧光定量 PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测 NF-κB、TNF-α、IL-1β 的 mRNA 表达。结果:1.初步发现脑舒明方抗脑缺血的活性成分主要为β谷甾醇、人参皂苷Rh2及柚皮素等,作用靶点可能为PTGS1、CHRM1、SLC6A2、CHRM2、SLC6A4、BCL2、C ASP3、C ASP8、TNFSF15、NFKBIA、IL1B、ADC YAP 1、NOS2、REL A、AKT1、MAPK3、MAPK1、BAD、GSR 等基因。2.初步发现脑舒明方治疗脑缺血的机制可能与细胞凋亡通路、TNF通路、cAMP通路、IL-17通路、AGE-RAGE通路、Toll样受体通路及神经营养素信号通路等有关。3.动物实验发现造模后第14d模型组与第3d相比,神经功能评分降低(P＜0.05);另外,第7 d脑舒明方高、中、低剂量组与同时间模型组相比,神经功能评分均降低,且在中剂量时效果最明显(P<0.01);第14d脑舒明中剂量组与模型组比较,神经功能评分降低(P<0.05)。4.动物实验发现脑缺血后可见各炎症因子蛋白表达大量增加(P<0.01),且第7d时达到高峰,14d时下降。各干预组炎症因子的蛋白表达水平与同时间模型组比较明显下降(P<0.01)。5.动物实验发现脑缺血后其各项炎症因子的mRNA表达显著增加(P<0.01),并在7 d达到高峰,至14 d时下降,各干预组炎症因子的mRNA表达水平与同时间模型组相比,均显著降低(P<0.01或P<0.05),和蛋白表达规律相似。结论:1.脑舒明方抗脑缺血损伤具有多成分、多靶点协同作用的特点,其作用机制可能与抑制炎症密切相关。2.脑缺血后大脑的炎症反应会显著增强,并出现神经功能障碍。脑舒明方能降低脑缺血大鼠NF-κB、TNF-α以及IL-1β的表达,并改善神经功能评分。