Toll样受体3活化对小鼠脂肪干细胞生物学功能的影响

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脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cells, ASCs)能够自发迁移至组织损伤或炎症部位,通过细胞因子对免疫细胞的调控,发挥免疫调节作用;而且与研究最广泛的骨髓间充质干细胞相比,ASCs具备来源丰富、提取方便等优势。因此,ASCs已经成为组织损伤修复、自身免疫性疾病等疾病治疗的研究热点。而如何进一步提升ASCs的迁移能力、免疫调节能力和其抗炎能力,是干细胞治疗领域的一个重要研究方向。通过聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly(I:C))对ASCs Toll样受体3(TLR3)的激活,本论文构建了一种全新的脂肪干细胞表型(定义为ASC2)。本论文通过研究ASC2集落形成单位、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原标志的表达、免疫调节因子的表达以及迁移能力等,检测TLR3的活化对ASCs生物学功能的影响。本论文首先利用酶消化法,从健康小鼠供体的腹部脂肪组织中提取ASCs,通过体外培养扩增、诱导分化、集落形成及细胞表面抗原标志的分析,确定分离出的细胞为ASCs。然后,将TLR3激活剂Poly(I:C)加入ASCs培养液中,诱导出ASC2。通过流式细胞仪测试、Real-time PCR、染色鉴定等多种检测方法,将ASCs和ASC2在表面抗原标志表达、细胞因子的分泌、集落形成单位、成骨成脂分化及迁移能力等方面进行了对比。实验结果显示ASCs与ASC2茜素红、油红O染色结果均呈阳性,染色结果没有明显差距;流式分析结果显示ASCs和ASC2均阳性表达Scal和CD106,阴性表达CD11b、CD45、CD34和CD31; ASCs和ASC2集落形成单位测试没有显著性差异,说明TLR3的活化对ASCs的成骨成脂分化能力、细胞表面标志表达及体外增殖能力没有造成显著性影响。但是,Real-time PCR的结果表明TLR3的活化增强了IL-6、TGF-β、RANTES和VEGF的表达,抑制了KC、MCP-1和Eotaxin-1的表达;趋化性实验则证实了TLR3的活化增强了ASCs的迁移能力。本论文证实了TLR3的活化并没有改变ASCs的干细胞特性,ASC2仍然保持了体外自我更新增殖、分化潜能以及表达特定抗原标志的特性。但是,TLR3的活化改变了ASCs细胞因子的表达和迁移能力,从而改变了其免疫调节作用,提高了其抗炎能力,使得ASC2更好的应用到自身免疫性疾病,比如1型糖尿病等治疗中。
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