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贝伐株单克隆抗体是美国第一个获得批准上市的抑制肿瘤血管生成的药,用于多种癌症的治疗。本课题的目的是研究开发贝伐株单克隆抗体的制备工艺,并通过质量研究确证其分子结构、质量属性及稳定性,为商业化生产奠定基础,进而使国人能够获得用得起的国产良药,提高患者的生活质量。采用重组DNA技术,人工合成贝伐株单克隆抗体重链与轻链基因,将此克隆的重链与轻链基因片段分别插入到自行构建的一种高效逆转录病毒前载体,将获得重链表达前载体和轻链表达前载体分别与病毒包装质粒p HCMV-G共转染包装细胞293GP,制备获得两种分别携带有贝伐株单克隆抗体重链与轻链基因的逆转录病毒载体。两种逆转录病毒载体先后交替转导CHO-S细胞,获得可稳定表达贝伐株单克隆抗体的工程细胞。应用先进的细胞培养技术,经过细胞的扩增培养和发酵表达培养,在哺乳动物细胞表达系统中国仓鼠卵巢细胞中产生贝伐珠单抗,然后采用包括病毒灭活和去除步骤在内的纯化工艺进行纯化,再经过配制、除菌过滤、无菌灌装等制剂生产工艺获得成品。通过多次实验对细胞培养工艺、纯化工艺及制剂生产工艺的各个工艺参数进行不断的摸索和优化,最终确定了高效表达贝伐株单克隆抗体的生产工艺。并对该工艺条件下生产出来的原液和成品进行了质量分析和稳定性研究,各检测结果均合格,工程细胞株传代稳定性良好,细胞培养表达量高,纯化工艺获得的原液纯度高,本品7批中试原液和成品的质量研究表明本品批间高度一致;和上市对照品AVASTIN®的一级氨基酸序列完全一致,在模仿AVASTIN®制剂处方的基础上,进行了优化,优化后的处方优于AVASTIN®的处方。3批结构确证和质量属性(其中N-糖糖谱分析、糖基化位点分析、二硫键配对分析为1批)研究结果表明本品批间高度一致性且和上市对照品高度相似。本课题研究获得的贝伐株单克隆抗体高效表达的制备工艺可实现,且能够持续稳定的生产出与原研药高度相似的产品,该制备工艺可以用于规模化生产,本项目可以进一步开展临床申报工作。