论文部分内容阅读
齐墩果酸（Oleanolic acid，OA）是一种天然的五环三萜类化合物，普遍存在于食物及120余种天然植物的子叶和根茎中。目前报道齐墩果酸的药理作用包括保肝解毒、降血糖血脂、抗炎抗病毒、抗肿瘤及抗氧化等。而近年来，齐墩果酸在抗氧化方面的活性引起了人们广泛的关注。但是，目前尚没有文献报道过齐墩果酸在体内的抗衰老活性及可能潜在的作用机制。 目的：以秀丽隐杆线虫（Caenorkabditiselegans，C.elegans）为研究对象，评价齐墩果酸的延寿作用效果并探讨其延寿的分子机制。 方法：1.寿命分析实验：将同步化的L4期线虫分为空白对照组（0μM）和OA给药组（100μM、200μM、300μM、600μM）进行寿命实验，初步判断OA的延寿效果并筛选出最佳给药浓度。2.压力应激实验：通过氧应激实验和36℃热应激实验，确定OA延长线虫寿命的作用与压力应激反应是否存在关联。3.线虫体内活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）检测：通过探讨OA对线虫体内ROS的清除能力以进一步确定OA的延寿效果。4.咽泵实验：比较3、6、10天的空白对照组与OA给药组线虫在15s内的咽泵次数以及限食相关突变株寿命实验，综合判断OA的延寿效果是否与热限制机制有关。5.daf-16(mgDf50)突变株寿命实验：探讨OA对缺失daf-16基因的线虫寿命是否存在影响。6. DAF-16亚细胞定位实验：给药后观察DAF-16::GFP转基因线虫中DAF-16的亚细胞定位情况。7. Quantitative real-time PCR实验：OA给药后提取线虫内总RNA，利用荧光定量PCR检测daf-16及下游相关基因sod-3、ctl-1、hsp-16.2的表达量变化。 结果：1.通过寿命分析实验可知OA在一定的浓度范围内可延长线虫寿命，且300μM OA为最佳给药浓度。2. OA能显著提高线虫在氧应激、热应激环境下的生存率，证实OA延寿作用与压力应激反应有关。3. OA能够降低线虫内ROS的水平，进一步说明OA具有延寿效果。4. OA不影响线虫的咽泵频率及限食突变株的寿命长短，从而确认OA的延寿作用不是通过热量限制途径实现的。5.分子机制研究表明，OA促进DAF-16进入细胞核以提高DAF-16的转录活性，进一步启动与衰老相关的下游基因的表达，从而延长线虫的寿命。 结论：综上所述，我们以线虫为实验对象，评价了OA的延寿作用并对其潜在的分子机制进行了初步探索。daf-16是一个从线虫到哺乳动物都高度保守的寿命调控转录因子，此研究有助于将齐墩果酸应用于衰老相关疾病提供新思路。