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目的1.研究CYR61 (cysteine-rich 61; CCN1)对脉络膜视网膜内皮细胞(RF／6A细胞系)增殖、迁移及形成管状结构的影响。2.研究CYR61在糖尿病小鼠和正常小鼠视网膜的表达和分布情况及其差异。3.研究增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体CYR61的表达水平,以及CYR61在视网膜增殖膜内的表达和分布。方法1.通过MTT比色实验观察CYR61对RF／6A细胞增殖能力的影响：应用Transwell小室观察CYR61作用下,RF／6A细胞迁移能力的变化；采用Matrigel基质胶,观察CYR61对RF／6A细胞形成管状结构的影响。2.腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病小鼠模型,通过免疫组织化学方法观察CYR61在糖尿病小鼠视网膜的表达和分布,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析视网膜Cyr61 mRNA的表达情况。3.收集玻璃体切除手术患者的玻璃体液和视网膜前膜,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定PDR患者和非糖尿病患者玻璃体CYR61的浓度,利用免疫组织化学方法观察CYR61在PDR、增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)和特发性黄斑前膜患者的视网膜前膜中的表达和分布情况。结果1.用不同浓度的CYR61(0,5ng/mL, 10ng/mL,50ng/mL, 100ng/mL,500ng/mL)干预RF／6A细胞72h,随着CYR61浓度增加,MTT比色实验的吸光度A490nm值升高,其差异有统计学意义(p=0.000)；400ng/mL Cry61干预RF／6A细胞不同时间(0,12h,24h,48h,72h),随着时间延长,A490nm值升高,其差异有统计学意义(Jp=0.000)。Transwell小室实验中,随着CYR61浓度增加,迁移的RF／6A细胞增加(p=0.000),400ng/ml CYR61促进细胞迁移的能力与80ng/ml VEGF相当,而加入抗CYR61抗体则可以起到显著的抑制作用。Matrigel基质胶实验中,随着CYR61浓度增加,RF／6A细胞形成的管状结构增多(p=0.000),400ng/ml CYR61与80ng/ml VEGF的作用相当,而加入抗CYR61抗体则可以起到显著的抑制作用。2.在正常小鼠的视网膜,CYR61在神经节细胞层、内丛状层、外从状层和光感受器层均有表达,其中外从状层表达较强,其余各层弱阳性染色；在糖尿病小鼠的视网膜,CYR61同样在以上各层表达,但神经节细胞层和内丛状层的表达较正常小鼠明显增强,神经节细胞胞浆内出现团块状的阳性染色。糖尿病小鼠视网膜Cyr61 mRNA的表达较正常对照组增加,差异具有统计学意义(p=0.009)。3.PDR组玻璃体CYR61浓度为97.53±34.13 (41.21～154.74) ng/mL,对照组玻璃体CYR61浓度为33.92±18.68 (6.24～70.04) ng/mL,两组有显著性差异(p=0.000)；视网膜和增殖膜新生血管丰富者玻璃体CYR61明显高于无明显新生血管者(p＝0.001)；未发现玻璃体CYR61与患者年龄、糖尿病病程及术前空腹血糖有关(p>0.05)。CYR61分布于视网膜前膜的细胞胞浆中,在PDR视网膜前增殖膜中管腔样结构的管壁细胞高度表达,在其它细胞也可见散在的阳性染色；PVR视网膜前增殖膜及特发性黄斑前膜中,有散在的阳性染色细胞。结论CYR61在体外可以促进脉络膜视网膜内皮细胞增殖、迁移及形成管状结构；糖尿病小鼠视网膜Cyr61 mRNA和蛋白的表达均较正常小鼠升高：PDR患者玻璃体CYR61含量明显高于非糖尿病患者,CYR61表达于PDR视网膜前增殖膜,尤其在管腔样结构的管壁细胞高度表达。CYR61很可能参与糖尿病视网膜病变的发病,在PDR新生血管的形成过程中起一定的作用。