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近年来,禽流感的暴发与流行给养禽业的发展和公共卫生安全造成了严重的危害,做好禽流感的诊断与监测显得尤为重要。禽流感病毒亚型众多且变异性强,给检测带来了很大困难。因此,本研究制备了一株针对禽流感病毒NP蛋白的型特异性单克隆抗体,经过鉴定及初步应用,用该单抗初步建立了一种快速的针对禽流感抗原的胶体金试纸条检测方法,以期用于禽流感的监控。 1.单抗的制备:蔗糖梯度离心纯化的H9N2亚型AIV免疫小鼠,经PEG法融合,用建立的间接ELISA方法筛选,三次克隆后得到一株分泌针对H9、H7、H5三种亚型禽流感病毒抗体的单克隆杂交瘤细胞株（A1284）,三株仅分泌针对H9亚型流感病毒抗体的单克隆杂交瘤细胞株（G4A3、C9C2、G7A9）。 2.单抗的鉴定:对四株单抗进行了亚类鉴定,仅对A1284株进行了染色体、亲和力等其它特性的鉴定。A1284株、G4A3株、G7A9株、C9C2株单克隆抗体亚类分别为IgM、IgG1、IgG1、IgG2a,轻链均为K链。杂交瘤细胞A1284染色体数目为98条,其单抗针对H9、H7、H5三种亚型禽流感病毒的亲和常数K分别为3.17×1010、3.17×1010、5.5×1010,上清及腹水的ELISA效价分别为1:104、1:106。免疫印迹分析表明,A1284株单抗是针对禽流感NP蛋白的型特异性单抗。 3.单抗的初步应用:A1284株腹水经优球蛋白沉淀法纯化后与胶体金标记,应用于胶体金试纸条检测试验,金标A1284株单抗与H9、H7、H5三种亚型禽流感病毒反应结果呈阳性。 通过制备和初步应用禽流感病毒NP蛋白特异性单克隆抗体,为进一步临床应用打下基础,为禽流感乃至人禽流感的诊断提供一种有用试剂和快速、准确、实用的诊断方法。