【摘 要】
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以壳聚糖为载体,分别用戊二醛交联法、环氧氯丙烷法、甲醛活化法、羰基二咪唑活化法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了戊二醛
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以壳聚糖为载体,分别用戊二醛交联法、环氧氯丙烷法、甲醛活化法、羰基二咪唑活化法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了戊二醛交联法固定化酶,酶的活力回收最高。酶固定的最适条件为：1g用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5mL1%戊二醛在25℃交联8h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13U,4℃吸附6h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收达为63%,固定化酶的比活为0.082U/mg。固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA,游离、固定化蚯蚓纤溶酶不能水解血红蛋白、超氧化物歧化酶和凝血酶原。用戊二醛交联法固定蚯蚓纤溶酶8号单组分,确定了酶固定的最适条件为：1g用pH7.0的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5mL1%戊二醛在25℃交联4h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶8号1.9IU,4℃吸附6h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收达45.3%,固定化酶的比活为0.0086U/mg。游离、固定化8号组分都可将纤维蛋白原水解,但都不能水解BSA。
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