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目的:间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)存在于多种组织,这一种多能干细胞能表现出多向分化、免疫调节等能力。脂肪组织具有获取风险低、伦理约束少等优势,脂肪来源的间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC)是间充质干细胞领域研究的一个重点。实验表明ADSC具有明显的免疫调节能力,目前已有相关团队展开ADSC用于临床移植术后患者抗排斥的治疗,其免疫调节机制与调控CD4+T细胞增殖有关。但MSC用于临床治疗目前存在细胞来源不足?单次输注剂量有限等问题限制其治疗效果,目前亟需一些简单?有效且稳定的预处理细胞方法以提高ADSC的免疫调节作用?本实验通过降低ADSC培养环境的氧气体积分数(5%)并改变培养液中葡萄糖浓度(5.56mM?17.5mM?30mM)以研究这两种预处理条件对ADSC免疫调节能力的作用,并初步探索两因素之间的相互作用情况?本实验可为提高ADSC的免疫调节效能提供新的思路,为解决部分ADSC临床应用问题提供实验基础?研究方法:本研究使用胶原酶法提取C57BL/6小鼠ADSC,使用流式细胞仪检测其表面抗原CD29、SCA-1、CD34与CD45表达情况,并通过培养诱导法检测其成脂、成软骨与成骨分化能力。使用免疫磁珠法提纯C57BL/6小鼠CD4+T细胞并使用CFSE标记,提取BALB/c小鼠脾细胞作为刺激细胞,使用CD4+T细胞与脾细胞构建混合淋巴细胞反应。在氧体积分数21%环境下使用葡萄浓度为17.5mmol/L的培养基培养ADSC至第3代用于后续实验。将ADSC分为六组,其中三组在低氧环境(氧体积分数5%)中分别使用葡萄糖浓度为5.56mmol/L,17.5mmol/L及30mmol/L的培养基,另三组在常氧环境(氧体积分数21%)中同样分别使用葡萄糖浓度为5.56mmol/L,17.5mmol/L及30mmol/L的培养基。六组ADSC在各自的培养环境下预处理5d后收获、定量并接种于96孔板,在各组原有培养条件继续培养至贴壁。混合淋巴细胞反应共有三个分组,其中ADSC组为六种不同预处理条件ADSC与CD4+T细胞按1:4比例所设置的六个实验组;MLR组为单独培养的混合淋巴细胞,不加入ADSC;对照组为单独培养的混合淋巴细胞加入他克莫司。MLR共培养5d,使用流式细胞仪检测CFSE峰值变化情况以判断各组CD4+T细胞增殖改变。增殖抑制率用x±s表示,使用SPSS软件进行统计学分析,多样本均数比较采用LSD-t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.ADSC的鉴定结果符合ADSC的特性。2.低氧组CD4+T细胞增殖抑制率较常氧组增高(P<0.05)。3.在低氧环境中,葡萄糖浓度30mmol/L组的CD4+T细胞增殖抑制率较葡萄糖浓度17.5mmol/L及葡萄糖浓度5.56mmol/L组增高(P<0.05)。葡萄糖浓度17.5mmol/L组及葡萄糖浓度5.56mmol/L组的CD4+T细胞增殖抑制率无统计学差异(P>0.05)。4.在常氧环境中,三组不同葡萄糖浓度组间的CD4+T细胞增殖抑制率无统计学差异(P>0.05)。结论:1.低氧预处理ADSC可增强其抑制CD4+T细胞增殖的能力。2.常氧环境中,短期的培养液葡萄糖浓度改变对ADSC的免疫调节能力的影响不明显。3.30mmol/L浓度葡萄糖培养液可增强低氧预处理对ADSC的免疫调节能力的影响。