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艾滋病的流行严重威胁着人类社会的安全和发展,引起这种疾病的病原体是人类免疫缺陷病毒HIV。在对AIDS缺乏高效治疗药物和有效疫苗的情况下,对高危人群和献血人员进行HIV抗体检测,限制传染源,中断传播途径是预防和控制艾滋病蔓延的重要措施之一。因此,准确、快速、高效、低成本的HIV筛查及确诊系统无疑是HIV防治工作的当务之急。本文首先使用全基因合成的方法,选择大肠杆菌偏好性的密码子,合成得到了HIV膜蛋白和整合酶的cDNA,将其插入到表达载体PET-HIS,得到相应的工程菌。工程菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析,结果表明表达产物以包涵体显示存在且均与HIV-1阳性血清有特异性反应。对重组HIV整合酶P31工程菌的培养条件进行了研究,通过考察不同的诱导条件,得出了优化实验方案:工程菌在37℃培养至OD600为0.8,加入0.6 mmol/L IPTG,32℃诱导5小时。在5L发酵罐中进行了三批次的发酵培养,同时对发酵动力学进行分析和建立,使工艺适合于工业化生产并能具有可重复性和稳定性。对工程菌P31进行了相关的鉴定和稳定性研究,发现在传代过程中是相当稳定的。对重组HIV整合酶P31包涵体的制备、洗涤溶解纯化以及稀释复性等条件进行了研究,得出以下结论:采用冻融法、酶作用和超声破碎相结合的方法,能高效破碎重组HIV整合酶P31工程菌,破碎离心后所得的包涵体纯度比破碎前提高了约10%;几种洗涤剂洗涤效果比较来看,0.5% Triton X-100能出除一些脂多糖、核酸、脂类及杂蛋白等物质,还能溶解宿主细胞裂解过程中释放出来的膜蛋白等物质,洗涤后包涵体的纯度达到89.6%;在氧化还原比为GSSG/GSH=0.15,pH值为8.5,离子强度为0.15mol/L,4℃条件下,采用分步加样方式,P31稀释复性得到的效率较高。通过实验考察了SDS与β-环糊精(β-CD)构成的人工分子伴侣系统辅助整合酶P31复性过程。比较了不同电荷性质的表面活性剂对整合酶P31的复性效果,结果表明应优先选择与目的蛋白所带电荷相同的表面活性剂。考察了β-CD加入时间对复性效率的影响,表明SDS与P31复合物结构受其结合时间的影响,进而提出了人工分子伴侣辅助P31复性的作用机理。利用了园二色光谱法、荧光光谱法分析复性后的P31蛋白分子结构,结果表明与稀释复性相比,人工分子伴侣复性的P31具有更接近天然态蛋白质的二级结构和高级结构。经过反复多次试验调试,确定了膜条制备及操作工艺流程、膜反应介质、重组抗原包被浓度及酶稀释倍数、封闭液成分、动态质控线,并对其特异性进行了初步评价,初步建立了基于重组抗原的条带免疫检测HIV抗体方法。设计针对HIV-1整合酶基因特异性很强的LAMP引物,通过对Mg2+浓度、反应温度和时间等参数的优化,建立了一种快速检测HIV-1的RT-LAMP方法。该方法检测HIV RNA标准品,灵敏度达到155copies/mL。检测分析了171份已经确认结果的临床样本(18份HIV-1阳性,153份HIV-1阴性),结果表明:阳性样本与WB法有100%符合率,阴性样本与ELISA有100%符合率。本研究建立的HIV条带免疫确诊方法和恒温扩增检测方法均具有较高的灵敏度和特异性,且操作和结果判定容易,具有良好的应用前景。此检测系统的发展和应用为HIV的检测提供了新的手段。