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背景与目的：神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)为儿童常见的颅外实体肿瘤之一。尽管传统的治疗手段对提高神经母细胞瘤患儿的生存率已有一定程度的提高，但是儿童高危神经母细胞瘤病人的治愈率仍不尽令人满意。2.甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2-ME)是雌激素的天然代谢产物，对于多种肿瘤均显示出良好的抗肿瘤活性。然而，2-ME对人神经母细胞瘤(Neuroblastoma)的作用机制至今尚不清楚。本实验旨在观察2-ME单独和与临床化疗药物联合用药对人神经母细胞瘤SK-N-SH的作用并初步探讨其机制。
方法：Trypan blue法检测SK-N-SH细胞8天内的生长曲线。SRB法检测不同浓度2-ME单独和与临床化疗药物联合用药对SK-N-SH细胞增殖的抑制作用以及VC、L-GSH以及靶向线粒体抗氧化剂MitoQ10对2-ME抑制SK-N-SH细胞增殖的影响。流式细胞术Annexin-V/FITC标记法检测细胞周期分布情况。Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况。利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内的活性氧水平。Rhodamine123染色检测线粒体膜电位的变化。Western blot来检测2-ME处理过的SK-N-SH细胞Bcl-2、Bax和caspase-3，caspase-9，pERK蛋白的表达情况。
结果：2-ME单独应用对SK-N-SH细胞有明显的生长抑制作用，同时2-ME与环磷酰胺，5-氟尿嘧啶，顺铂，阿霉素联合用药具有明显的协同作用(CI<1)，但2-ME与依托泊苷联合用药具有明显拮抗作用(CI>1)，并且抑制效应在一定范围内呈剂量依赖性。VC可以使2-ME抑制SK-N-SH增殖72h的IC50由1.88μM升高到3.75μM，加入L-GSH及MitoQ10后，2-ME作用72h的抑制率明显降低，与2-ME相比有显著差异(P<0.05)。流式细胞仪显示2-ME将细胞周期阻滞于G2/M期。Hoechst33258荧光染色结果表明2-ME作用72h后细胞核致密浓染，核缩小，凋亡率分别为47.32％，71.56％。DCFH-DA检测结果表明细胞内的活性氧显著升高，MitoQ10阻断2-ME引起的线粒体活性氧的升高。Rhodamine123染色表明2-ME作用72h细胞线粒体膜电位下降，而L-GSH，MitoQ10均能阻断2-ME引起的线粒体膜电位的下降。Western blot检测表明2-ME作用SK-N-SH细胞48h后，Bcl-2/Bax蛋白的比值表达下调，caspase-9，caspase-3蛋白则表达上调，但是MitoQ10阻断2-ME引起Bcl-2/Bax和Caspase-9 caspase-3蛋白表达的变化。2-ME作用20min明显抑制SK-N-SH细胞pERK蛋白水平，而MitoQ10并不阻断2-ME引起的pERK蛋白水平的变化。
结论：2-ME单独和与临床化疗药物联合用药均能能抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH增殖，2-ME诱导人神经母细胞瘤的凋亡与线粒体内ROS的积聚升高有关，同时我们发现2-ME诱导pERK蛋白的表达与ROS水平的升高是两条不同的信号转导通路。