草地早熟禾和高羊茅的组织培养及植株再生

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现代生物技术在最近20多年取得了飞速的发展,已广泛应用于包括草坪草在内的农作物的品种改良。利用基因工程技术,把外源基因导入植物细胞或组织是现代作物遗传育种的重要途径。将功能基因有目的、有针对性地导入特定品种的愈伤组织或原生质体,获得改良的转基因植物,提高草坪草的抗逆性,成为该领域的研究前沿。建立高效的组织培养和植株再生体系是转基因成功的前提。本研究以冷季型草坪草草地早熟禾(Poapratensis)的4个品种优异(Merit)、纳苏(Nassau)、抢手股(Bluechip)、珠峰(Everest)和高羊茅(Festucaarundinacea)的4个品种翠波(Tripple)、爱瑞3(Arid3)、奋进(Endeavor)、踏火(TarHeer)的成熟种子为外植体材料,探讨外植体的消毒方式、不同激素组合、不同的基因型、不同的培养基对愈伤组织诱导、继代培养以及植株分化的影响。此外,还在基本培养基中附加不同浓度的铜离子、脯氨酸、ABA对愈伤组织进行改造,并采用脱水处理的方法,以得到在多次继代后仍能够保持旺盛分化能力的胚性愈伤,建立高羊茅和草地早熟禾高效的再生系统,为进行基因工程研究打下基础。本文的研究结果如下: 种子用浓硫酸(98%)处理50.100s、0.1%的HgCl2浸泡2-4rain、无菌水洗涤5-7次,可以完全杜绝污染,并使外植体保持较高的愈伤组织诱导率。 不同基因型的草地早熟禾,其愈伤组织的诱导对激素有不同的要求,且其出愈率及胚性愈伤形成率也有很大不同。在供试的4个品种中,当2,4-D浓度为4mg/L、6-BA浓度为0.1mg/L时,优异的愈伤组织诱导率可高达97.3%;当2,4-D为2m/K、6-BA浓度为0.1mg/L时,纳苏和珠峰可达最高出愈率,分别为84%和74。7%;当2,4-D为0.5mg几、6-BA浓度为0.2mg/L时,抢手股可达最高愈伤组织诱导率70.7%。4个品种的愈伤组织诱导能力为:优异>纳苏>珠峰>抢手股。 对高羊茅而言,其愈伤组织对生长素的要求远远高于其它禾本科植物,细胞分裂素的存在会严重阻碍其愈伤组织的形成。当2,4-D浓度为18mg/L时,翠波和奋进两个品种可达最高愈伤组织诱导率,分别为78.9%、65.6%;爱瑞3在2,4-D浓度为12mg/L时,其愈伤诱导率可达65.8%;踏火在2,4-D浓度为15mg几时,愈伤组织诱导率最高,为65.6%。 比较了N6、B5、Ms、NBM4种培养基,发现NBM培养基更有利于供试品种愈伤组织的形成和植株的分化。 脯氨酸对胚性愈伤的形成不起积极作用,在培养基添加CuS04、ABA及对愈伤组织进行脱水干燥处理都能在一定程度上改造愈伤组织的状态,其中0.2mg/L的CuS04和13mg/L(5#mol/L)的ABA有助于形成致密、呈颗粒状有序排列、干爽、亮黄色的胚性愈伤。在分化过程中,草地早熟禾的供试品种鲜见白化苗现象,而高羊茅的几个品种均有不同程度的白化苗率,翠波的为8.6%,爱瑞3的高达94.2%。 随着继代次数的增加,草地早熟禾和高羊茅愈伤的分化能力逐渐衰退。高羊茅的翠波分化能力在前两个月可接近或达到100%,在第5个月时开始明显衰退,6个月后降为56.7%;草地早熟禾的优异在前3个月都可以保持极高的分化能力,4个月后快速衰退,为48.3%,6个月后仅为8.3%。
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