反义miR-103上调TIMP-3影响子宫内膜癌侵袭和增殖能力的体外研究

• 作 者: 余东琪
• 机 构: 东南大学
• 出 处: 东南大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 子宫内膜癌 反义核酸技术 发病机制 细胞增殖

目的：子宫内膜癌发病率呈逐年增高趋势，严重影响女性生命健康，因此探讨子宫内膜癌的发病机制有重要的意义。目前大量研究表明MiRNA在多种肿瘤中存在异常表达，且与肿瘤的发生、发展及转移等有密切的关系。MiRNA103在子宫内膜癌中表达异常增高，本研究利用反义技术下调miR-103的表达后，结合生物信息学和分子生物学技术验证其在子宫内膜癌细胞株中的靶基因TIMP-3，并探讨其通过调控靶基因在子宫内膜癌细胞株中发挥的生物学功能，为理解miR-103在子宫内膜癌形成过程中的作用提供依据。　　
方法：体外培养子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1B细胞株，利用脂质体介导Anti-miR-103转染入细胞，以无义随机序列作为对照，实时定量PCR技术检测miR-103表达水平的变化；构建荧光报告载体质粒pGL3/TIMP-3-wt和pGL3/TIMP-3-mut，并将其与Anti-miR-103和海肾质粒共转染，检测荧光素酶活性的变化；Western blot技术检测转染Anti-miR-103后Ishikawa和HEC-1B细胞株中TIMP-3蛋白质表达的变化；MTT法检测miR-103下调后对细胞增殖能力的影响；Annexin V-PE双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况；Tranwell肿瘤侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。　　
结果：实时定量PCR证实转染Anti-miR-103后，Ishikawa和HEC-1B细胞株中miR-103的表达水平明显下调；Anti-miR103和pGL3-TIMP-3-wt共转染组相对荧光活性值明显高于无义随机序列和pGL3-TIMP-3-wt共转染组；Westem blot技术证实转染Anti-miR-103后可明显上调TIMP-3蛋白质表达；MTT法证实转染Anti-miR-103后可明显抑制细胞的增殖能力；细胞凋亡检测提示转染Anti-miR-103组与阴性对照组相比细胞凋亡情况无明显差别；Transwell肿瘤细胞侵袭实验提示转染Anti-miR-103后子宫内膜癌细胞株的侵袭能力明显下降。　　
结论：利用反义技术下调miR-103的表达后，可通过调控靶基因TIMP-3降低子宫内膜癌细胞株的增殖和侵袭能力。