Dicer调节人乳腺癌MDA-MB-231细胞株生物学行为的研究

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目的:Dicer是核糖核酸酶III家族的一员,是miRNA成熟过程中必需的关键酶,而miRNA与乳腺癌的发生发展以及耐药等方面密切相关。Dicer的改变是影响miRNA表达失调的重要原因之一。已在人体多种恶性肿瘤中发现Dicer基因表达异常,因此乳腺癌的发生发展可能与Dicer表达异常有关。通过对比转染Dicer前后乳腺癌MDA-MB-231细胞在细胞功能上的差异,探讨Dicer对于乳腺癌MDA-MB-231细胞功能上的影响。同时从蛋白水平上研究转染Dicer前后乳腺癌MDA-MB-231细胞中Her-2表达水平的差异,探讨Dicer过表达与Her-2蛋白表达之间是否具有相关性,为乳腺癌的临床治疗提供新思路。方法:筛选获得空白对照组(MDA-MB-231细胞)、阴性对照组(MDA-MB-231-control细胞)、实验组(MDA-MB-231-Dicer细胞)三组细胞,应用CCK8法检测过表达Dicer对MDA-MB-231细胞增殖的影响,应用流式细胞学技术检测Dicer对细胞凋亡的影响,应用细胞划痕及Transwell小室检测Dicer对细胞迁移、侵袭能力的影响。再应用蛋白印记(Western-Blot)检验三组细胞中Her-2蛋白的表达量,从蛋白水平分析Dicer过表达与Her-2蛋白表达量之间的相关性。结果:1.慢病毒感染后细胞绿色荧光蛋白GFP表达结果显示细胞感染效率达到80%,且细胞形态在感染前后无明显改变。经嘌呤霉素加压筛选获得稳定转染的MDA-MB-231-Dicer细胞株和MDA-MB-231-control细胞株。2.MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-control细胞Dicer基因蛋白表达未见明显差异(P>0.05),MDA-MB-231-Dicer细胞Dicer基因蛋白表达高于MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231-control细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。3.MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-control细胞增殖未见明显差异(P>0.05),而MDA-MB-231-Dicer细胞增殖速度低于MDA-MB-231-control细胞及MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。4.MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-control细胞迁移未见明显差异(P>0.05),而MDA-MB-231-Dicer细胞迁移能力低于MDA-MB-231-control细胞及MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。5.MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-control细胞侵袭未见明显差异(P>0.05),而MDA-MB-231-Dicer细胞侵袭能力低于MDA-MB-231-control细胞及MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。6.与MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231-control细胞相比,MDA-MB-231-Dicer细胞Her-2表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.Dicer抑制了乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭能力;2.Dicer过表达可以诱导MDA-MB-231细胞中Her-2蛋白表达。
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