论文部分内容阅读
背景创伤性颅脑损伤(Traumatic Brain Injury, TBI)是神经外科常见急症,TBI后由于神经细胞的凋亡、坏死及炎症反应等继发性损伤,造成运动和感觉功能障碍,严重影响患者预后。目前,对神经细胞的继发损伤尚无切实有效的治疗方法。因此TBI后早期进行神经细胞的保护及炎症反应的控制是神经外科研究的一个热点。近年的研究发现丙戊酸(valproic acid, VPA)具有多方面的神经营养和神经保护作用。本研究在建立闭合性颅脑损伤动物模型的基础上,早期应用丙戊酸,通过行为学评分和脑组织内神经细胞凋亡情况、HSP70和caspase-3、TNF-α和IL-1β蛋白表达的变化,探讨VPA对TBI大鼠神经功能恢复的影响及其机制,为临床应用提供理论基础。目的通过建立大鼠闭合性颅脑损伤模型,观察丙戊酸干预后,不同时间点大鼠脑组织内神经细胞凋亡情况、HSP70和caspase-3、TNF-α和IL-1β蛋白表达的影响,及脑组织中TNF-α和IL-1β的动态变化,探讨丙戊酸对实验性颅脑损伤大鼠的抗细胞凋亡、神经保护作用和减轻炎性反应的作用。方法将健康SD雄性大鼠随机分成正常对照组、单纯损伤组、VPA治疗组。建立大鼠闭合性颅脑损伤模型,采用神经系统疾病严重程度评分(Neurological Severity Scores, NSS)来评价各组大鼠不同时间点的神经功能；运用光学显微镜观察脑组织形态学的改变,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测大鼠脑组织内细胞凋亡情况；运用免疫组织化学染色法(SP法)对各组不同时间点内脑细胞中的HSP70和caspase-3蛋白进行检测；利用免疫荧光技术检测各组不同时间点内脑细胞中的TNF-α和IL-1β蛋白表达情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组不同时间点内脑组织中TNF-α和IL-1β的动态变化,并作统计学分析。结果1.行为学测定显示：大鼠行为学评分结果VPA治疗后大鼠神经功能有不同程度的恢复,在创伤后3d内3组间差异无显著性意义(P>0.05); VPA治疗后7d、14d、21d、28d, VPA治疗组神经功能恢复程度优于单纯损伤组,两组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。2.原位末端标记法(TUNEL)检测显示：单纯损伤组与VPA治疗组大鼠损伤区皮质各时间点凋亡阳性细胞数均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。VPA治疗组各时间点凋亡阳性细胞数均低于单纯损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组织化学检测显示：VPA治疗组相同时间点HSP70平均灰度值明显低于单纯损伤组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。VPA治疗组相同时间点caspase-3平均灰度值明显高于单纯损伤组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。4.免疫荧光技术检测：VPA治疗组相同时间点脑组织TNF-α和IL-1β阳性细胞数明显低于单纯损伤组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。5.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测：造模后单纯损伤组和VPA治疗组相同时间点脑组织中TNF-α和IL-1β蛋白浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05); VPA治疗组相同时间点脑组织中TNF-α和IL-1β蛋白浓度均低于单纯损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论VPA治疗后能够改善创伤性颅脑损伤大鼠的神经功能；VPA有抗细胞凋亡、保护神经细胞和减轻炎性反应的作用。