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目的观察上调核型Clusterin的表达对人非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的影响,观察细胞增殖、细胞周期和迁移侵袭的改变。为核型Clusterin能否作为靶点治疗非小细胞肺癌提供依据。方法1.构建核型Clusterin的真核表达质粒pIRES-nCLU。2.应用脂质体转染方法将质粒pIREShyg3和重组表达质粒pIRES-nCLU转染人非小细胞肺癌A549细胞,用潮霉素B筛选得到稳定转染的细胞株以及对照细胞株。3.通过Western Blot方法对转染前后细胞中核型Clusterin基因的表达情况进行鉴定。4.CCK-8法测定核型Clusterin对人非小细胞肺癌A549细胞体外增殖的影响,并绘制细胞增殖曲线。5.标准PI染色流式细胞计数法(flow cytometry,FCM)检测核型Clusterin对人非小细胞肺癌A549细胞细胞周期分布的影响。6.体外迁移实验(transwell)检测核型Clusterin对人非小细胞肺癌A549细胞体外运动迁移能力的影响;体外侵袭实验(transwell)检测核型Clusterin对人非小细胞肺癌A549细胞体外侵袭能力的影响。结果1.重组表达质粒pIRES-nCLU经双酶切电泳及DNA测序证明其序列的正确性。2.重组表达质粒pIRES-nCLU和空载体pIREShyg3分别转染A549细胞,潮霉素B筛选得到稳定转染的细胞株A549-nCLU以及对照细胞株A549-hyg。3.核型Clusterin的表达使A549细胞体外增殖明显减慢。4.核型Clusterin的表达使A549细胞G0-G1期细胞比例明显增加,由原来的33.3%上升到63.2%(P＜0.05),而S期细胞比例明显减少,由原来的66.7%下降到36.8%(P＜0.05)。5.核型Clusterin的表达使A549细胞体外迁移及侵袭能力明显减弱,A549-nCLU与对照细胞株A549-hyg相比运动迁移能力减弱了68.5%(P＜0.05);体外侵袭能力减弱了47.3%(P＜0.05)。结论上调核型Clusterin的表达具有明显抑制肿瘤细胞增殖,并且也可使细胞的运动迁移、侵袭能力明显减弱。