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目的与背景：随着老年社会的到来，有关衰老的研究就非常必要。儿童早老症(Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome，HGPS)是一种非常罕见的遗传疾病。HGPS的病因是由于A型核纤层蛋白前体(prelamin A)加工异常，产生截短50个氨基酸的蛋白所致；而prelamin A加工所需的金属蛋白酶Zmpste24缺失导致prelamin A不能被正常加工，出现大量堆积，同样表现出典型早衰的现象。可见prelamin A的加工过程与衰老密切相关，这个过程很可能通过 prelamin A相互作用蛋白来实现。本研究采用酵母双杂交系统筛选prelamin A相互作用蛋白，并对部分蛋白的功能进行了初步的研究。
方法：将预转人骨骼肌细胞cDNA文库酵母菌Y187(含AD质粒)与无自主激活的酵母菌AH109(含BD质粒)杂交融合后得到初筛候选阳性克隆；提取质粒并电击转化大肠杆菌JM109获得单一文库质粒再进行自主激活报告基因检测和一对一回复性杂交实验，最后筛选出真阳性克隆(即与人prelamin A相互作用的蛋白)。经上述一对一回复确证为阳性相互作用的AD质粒，以pACT2质粒的通用引物为测序引物测定该质粒的插入片段cDNA序列。并通过NCBI进行BLAST分析，最终确定这些相互作用蛋白的名称。将确定的蛋白的AD质粒与BD质粒pGBKT7-LA-C，pGBKT7-PLA和pGBKT7-LA再次进行一对一回复性杂交，确定这些相互作用蛋白与prelamin A全长以及lamin A蛋白的相互作用情况。用GST pull-down在细胞外进一步证实蛋白质间的相互作用，并运用RT-PCR及荧光蛋白融合表达了解该蛋白在人胚肾细胞内的表达情况。
结果：以prelamin A的C末端为诱饵蛋白筛选出21个阳性相互作用的蛋白。序列比对结果发现其中18个为已知蛋白，3个为未知新蛋白。与全长prelamin A和lamin A蛋白一对一回复性杂交发现其中20个蛋白与两者均能结合，仅有Narf不与lamin A蛋白相互作用，为prelamin A特异结合蛋白。GST pull-down结果进一步证实了人金属硫蛋白MT-2A与人lamin A C末端蛋白在细胞外的相互作用。荧光融合蛋白表达结果显示金属硫蛋白MT-2A存在于人胚肾细胞HEK-293的细胞核内；RT-PCR结果证明与正常细胞相比较，在衰老型的细胞HEK-293PLA中MT-2A表达下降。
结论：获得了21个能与prelamin A的C末端相互作用的蛋白：其中20个能与全长prelamin A和lamin A蛋白结合，仅Narf是prelamin A的特异性相互作用蛋白。其中的人金属硫蛋白MT-2A与人lamin A的C末端体外能够相互作用，该蛋白存在于HEK-293细胞的核内，且在衰老的细胞中表达下降。