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菊花(Chrysanthemum morifolium)原产于中国,是世界四大切花和我国十大传统名花之一,也是花中四君子之一,象征着清寒傲雪的品格,深受我国以及世界各国人民的喜爱,在花卉生产中占有重要地位。菊花插穗扦插生根率及生根速度是决定种苗质量的关键要素之一,因此,研究菊花扦插生根机制,提高菊花插穗生根率,缩短插穗生根时间,提高插穗生根质量是菊花生产上需要解决的重要问题。生长素作为植物中重要的激素之一,与植物根系的发生、伸长等作用有着密切的联系,其中生长素响应蛋白PCNT115在生长素对植物的调控作用中起着非常重要的作用,为此,本研究克隆了菊花中的生长素诱导蛋白CmPCNT115基因,对其序列进行了比对分析,并探究了其组织器官及不同处理下的表达特性,通过转化野生型拟南芥完成了初步的功能分析。主要研究结果如下:1.生长素诱导蛋白基因CmPCNT115的克隆利用RT-PCR和RACE等技术,从菊花’神马’中克隆了生长素诱导蛋白的cDNA片段,命名为CmPCNT115。CmPCNT115基因全长1177 bp,开放阅读框(ORF)为1023 bp,编码341个氨基酸,含有一个保守的NAPDH依赖的氧化还原酶结构域。序列比对发现,CmPCNT115与已知的木薯MeAKR同源性很高,为80%。系统进化树分析显示,CmPCNT115与芝麻SiPCNT115亲缘关系最近,同源性达45%。2.CmPCNT115在组织器官及不同处理下的表达特性qRT-PCR显示,CmPCNT115基因在菊花’神马’根中的表达量最高,并对生长素IAA和生长素抑制剂TIBA都有一个快速的响应。IAA外源激素处理下,CmPCNT115在24小时内出现了 一个表达量先升高后降低的快速响应趋势,其中,在处理后第4h表达量达到最高;而TIBA处理后,该基因的表达量略有下降,并都低于对照水平,且在12 h达到最低。IAA处理在0-7 d表现出先升高后降低的趋势,并在第4天时表达量达到最高;TIBA处理下,表现为略微下降至低于对照水平,并在第3天表达量达到最高,第7天达最低。3.IAA、TIBA处理对’神马,插穗生根的影响IAA处理下,菊花插穗根原基较早地发生,生根速度加快,而生长素抑制剂TIBA处理下,根原基发生较晚,生根速度较慢。可见,生长素确实对菊花插穗生根具有促进作用,而生长素抑制剂可以抑制内源生长素的作用,并延缓菊花插穗生根速度.4.CmPCNT115超表达拟南芥的获得及表型鉴定将CmPCNT115转化到农杆菌菌株EH4105中,通过农杆菌介导的花序浸染法将CmPCNT115转入野生型拟南芥,得到2个T3代超表达株系35S::CmPCNT115-1和35S::CmPCNT115-2.较野生型拟南芥,转基因株系主根增长,侧根数目明显增多.表明CmPCNT115对拟南芥根系生长过程起到了积极的促进作用.