【摘 要】
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【目的】肾素-血管紧张系统(RAS)在高血压、心肌肥厚(cardiac hypertrophy)及心力衰竭中的作用已被充分肯定，其中血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)是致心肌肥厚的重要刺激因子。细胞内钙增加可致心肌细胞肥大，其机制不清，但近年发现钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)信号通路(signaling pathway)介导心肌细胞内钙增加为导致心肌细胞肥大的重要通
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【目的】
肾素-血管紧张系统(RAS)在高血压、心肌肥厚(cardiac hypertrophy)及心力衰竭中的作用已被充分肯定，其中血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)是致心肌肥厚的重要刺激因子。细胞内钙增加可致心肌细胞肥大，其机制不清，但近年发现钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)信号通路(signaling pathway)介导心肌细胞内钙增加为导致心肌细胞肥大的重要通路，并发现CaN信号通路为AngⅡ及其受体的下游通路。
腺苷(adenosine,Ado)是一种内源性嘌呤核苷酸，在心血管系统中能发挥广泛保护作用，例如在心肌缺血预处理期、缺血期和再灌注期发挥多种保护效应。有学者通过乳鼠心肌细胞培养证实腺苷能通过激活其A<,1>受体拮抗AngⅡ所致的心肌细胞肥大，但作用方式不明，且腺苷与CaN信号通路的相互关系未见报道。因此本研究通过建立AngⅡ诱导的新生SD大鼠心肌细胞肥大模型，进一步研究腺苷Al受体激动剂——-2-氯环戊腺苷(2-Chloro-N<6>-Cyclopentyladenosine,CCPA)抗心肌肥大的作用，并探讨CaN信号通路在CCPA抑制AngⅡ诱导心肌细胞肥大反应中的作用。
【方法】
1．建立AngⅡ诱导的原代培养新生SD大鼠心肌细胞肥大模型：以终浓度为1×10<-7>mol/L的AngⅡlI刺激培养的心肌细胞48小时。
2．实验分组：随机分为4组：(1)正常对照组，(2)AngⅡ组，(3)AngⅡ+CsA组，(4)AngⅡ+CCPA组。CsA(终浓度为l00μg/L)，CCPA(终浓度为1×10<-6>mol/L)分别在AngⅡ(终浓度为1×10<-7>mol/L)作用前30分钟加入。处理后细胞置入培养箱孵育48小时后检测。
3．使用Photoshop 7.0测量心肌细胞表面积；通过噻唑蓝比色法(MTT法)检测心肌细胞活力；氚-亮氨酸(<3>H-Leu)掺入量反映心肌细胞蛋白质合成速率；使用半定量RT-PCR检测心肌肌球蛋白β重链(β-MHC)、钙调神经磷酸酶Aβ(CnAβ)的mRNA表达水平。
【结果】
1．AngⅡ作用心肌细胞48小时，显著增加心肌细胞表面积、心肌细胞活力。H．Leu掺入量(P<0.05或P<0.01)，并且有浓度有关。AngⅡ(1 x10<-7>mol/L)可明显增加β-MHC mRNA的表达(P<0.01)。
2．CaN特异性抑制剂环孢菌素A(CsA)可明显抑制AngⅡ(1x10<-7>mol/L)诱导的心肌细胞。<3>H-Leu掺入量的增加(P<0.01)，而CsA对正常心肌细胞<3>H-Leu掺入量无明显影响(P>0.05)。CsA(100μg/L)可明显抑制AngⅡ诱导的CnAp mRNA和β-MHC mRNA的表达(P<0.01)。
3．腺苷A<,1>受体激动剂CCPA可明显抑制AngⅡ(1x10<-7>mol/L)诱导的心肌细胞<3>H-Leu掺入量的增加(P<0.01)，且在lxl0<-8>mol/L～lx10<-6>mol/L浓度范围内呈量效依赖关系，而CCPA对正常心肌细胞<3>H-Leu掺入量无明显影响(p>0.05)。CCPA(1x10<-6>mol/L)可明显抑制AngⅡ诱导的CnAβ mRNA和β-MHC mRNA的表达(P<0.01)。
【结论】
腺苷A1受体激动剂——CCPA能够明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应，CaN信号通路在CCPA抑制肥大中起重要作用。
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