【摘 要】
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化疗是晚期肝癌患者辅助治疗的重要方法之一，但其效果不理想，肿瘤耐药性的产生是重要原因之一。目前研究发现肿瘤干细胞与化疗耐药性产生密切相关。因此，研究肝癌化疗耐药与肝癌
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化疗是晚期肝癌患者辅助治疗的重要方法之一，但其效果不理想，肿瘤耐药性的产生是重要原因之一。目前研究发现肿瘤干细胞与化疗耐药性产生密切相关。因此，研究肝癌化疗耐药与肝癌干细胞之间的相关性并阐明其耐药机制，可以为晚期肝癌的治疗寻找新的有效治疗靶点。本研究通过运用化疗药物阿霉素(ADM)梯度溶度作用Huh7.5.1肝癌细胞，诱导耐药细胞株Huh7.5.1/ADM的形成，通过检测比较Huh7.5.1/ADM与Huh7.5.1细胞之间表面标记物CD133+的表达差异及信号传导蛋白Smad3的表达变化，并测试运用Smad3特异性抑制剂SIS3作用后耐药细胞株CD133+表达的逆转情况，初步探索化疗是否可以诱导富集肝癌干细胞及其作用机制和寻找相关靶点。 采用化疗药物梯度浓度诱导法作用于Huh7.5.1肝癌细胞，经历12个月构建相对稳定表达CD133+表面标记物的耐药细胞株Huh7.5.1/ADM。通过CCK8实验分析比较Huh7.5.1和Huh7.5.1/ADM之间的对不同化疗药物的敏感性，qRT-PCR比较两者之间相关干性基因的表达差异，流式细胞仪分析比较两者之间细胞凋亡以及肝癌干细胞表面标记物CD133+分子的表达差异。平板克隆形成实验观察Huh7.5.1和Huh7.5.1/ADM的增殖状况。Western Blotting检测Smad3、pSmad3及各凋亡蛋白的表达情况以及使用Smad3特异性抑制剂sis3作用于Huh7.5.1/ADM稳定的细胞株之后信号通路上各相关蛋白的表达变化，并检测其对化疗药物的敏感性，分析运用SIS3后细胞干性变化。 实验证明，运用ADM梯度浓度诱导Huh7.5.1细胞后建立了相对稳定的耐药细胞株Huh7.5.1/ADM，成功富集了CD133+标记的干细胞，且pSmad3蛋白表达增强，运用SIS3后，成功逆转了CD133+的表达比例及干性的表达能力。 综上，ADM化疗耐药成功诱导富集了CD133+肝癌干细胞，且通过激活信号传导蛋白Smad3作用，SIS3靶向此位点具有逆转肝癌干细胞的作用。
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