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干旱是世界农业最主要的自然灾害,它影响植物的生长发育,造成作物严重减产,加剧了全球性的粮食危机。利用转基因技术培育抗旱新品种是提高植物抗旱性、利用干旱土地的一条有效的途径。在干旱胁迫条件下,植物通常会受到渗透胁迫和氧化胁迫伤害,甜菜碱是一种无毒的有机小分子化合物,在干旱胁迫下,甜菜碱能在植物细胞中迅速积累以维持细胞的渗透平衡,并对细胞内的一些重要酶类起保护作用。过氧化氢酶可以清除植物体内产生的H2O2,尤其在干旱条件下,在植物的抗氧化方面的作用更为重要。另外,CAT在植物体内主要存在于过氧化物体中,而叶绿体中不含有CAT,但是在干旱等胁迫条件下,叶绿体是产生活性氧的主要部位,活性氧的积累将严重损害叶绿体,对植物造成伤害。因此,我们将Cat与RuBP羧化酶小亚基转运肽(rbcS-3)融合(Tr),导入已经转入Badh的烟草中,使其在叶绿体中发挥作用。转基因烟草过量表达了外源蛋白,甜菜碱含量和CAT活性明显高于对照,提高了烟草抗胁迫能力。本论文利用转Badh和Cat基因的烟草为材料研究了转基因植物的抗逆机制,并为基因表达产物在叶绿体的定位提供了证据。结果如下:
1.经分离转基因植株叶绿体并进行Western blot证实,Cat基因表达产物已经定位于叶绿体,且目的蛋白在叶绿体中发挥作用。
2.PEG6000模拟干旱。转基因烟草的PSⅡ损伤程度小于野生型烟草,CAT活性和POD活性高于野生型烟草,MDA的含量低于野生型烟草,说明转Badh和Cat提高了植物的抗旱性。
3.NaCl胁迫处理。经不同浓度的NaCl处理,转基因烟草的PSⅡ损伤程度小于野生型烟草,CAT活性高于野生型烟草,MDA的含量低于野生型烟草,说明转Badh、转Cat和转Badh、Cat烟草的抗盐性高于野生型烟草。
4.百草枯胁迫处理。经不同浓度的百草枯处理,转Badh、转Cat和转Badh、Cat烟草CAT活性高于野生型烟草,PSⅡ损伤程度小于野生型烟草,说明抗氧化性高于野生型烟草。