论文部分内容阅读
匍匐翦股颖(Agrostis.stolonifera.L),英文名Creeping Bentgrass。它具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性,并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的是利用农杆菌介导法,将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中,以提高其抗病性能。本文比较了3个匍匐翦股颖育成品种(潘娜1号、海滨、普特)的再生能力,建立了这三个品种的植株再生体系,从中筛选出再生能力较强的品种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果如下:1.建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股颖潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体,进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明:在MS培养基上,以不同浓度2,4-D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时,普特的愈伤组织诱导率高于潘娜1号和海滨。2mg/L 2,4-D +0.1 mg/L 6-BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合,3mg/L 2,4-D +0.1 mg/L 6-BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45.2%、76.5%、87.0%;MSO为最适合的分化培养基,分化率分别为50.0%、59.0%、57.6%。1/2MS +1.0mg/L IBA为生根培养基。经比较海滨、普特的再生能力优于潘娜1号。2.探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素,建立了其基因转化体系。以培养10周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为外植体,以农杆菌菌株为介体,研究了该品种基因转化的若干影响因素,结果如下:匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感,因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性品种没有效果;抑菌剂选取羧苄青霉素为宜,浓度为300mg/L;浸染时间为10min为宜;菌液浓度OD600=0.3～0.5,与农杆菌共培养3天有利于转化。本试验得到46株转化植株,19株为普特品种,27株为海滨品种。取4株海滨品种和4株普特品种经荧光检测和PCR检测均呈阴性。