利用拉曼光谱研究雷公藤甲素诱导Jurkat细胞凋亡及细胞分子识别

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白血病是一种致死率比较高的恶性肿瘤疾病,也是儿童及35岁以下人群发病率最高的恶性肿瘤。白血病种类比较多,传统的诊断方法比较复杂,常用的化疗药物毒副作用大,这给白血病的早期诊断与治疗带来困难,研究新的诊断方法和抗癌药物具有重大的意义。  拉曼光谱是光与物质相互作用时,光子的非弹性碰撞所产生的散射光谱,能够揭示物质化学成分和分子结构等信息,广泛的应用于物理、化学、材料以及生物等领域。作为一种“指纹光谱”,拉曼光谱技术具有非入侵、损害小、灵敏度高、水干扰小和简单高效等优势,非常适合生物组织及细胞样品的探测。中药及其提取物具有毒副作用低、药源广泛的优势,其中一些有效成分可以诱导细胞凋亡,可用于癌症的治疗,拉曼光谱可以用于研究细胞凋亡的过程,能够从分子水平上揭示抗癌药物的作用机理。  基于表面电磁场增强效应或电荷转移机制,吸附在纳米粒子表面的分子的拉曼散射信号获得极大的增强,即表面增强拉曼散射(SERS)效应。它的灵敏度更高,可用于单分子的探测和癌细胞的检测。细胞的表面标志物在疾病的检测中具有非常重要的作用,结合纳米粒子的表面增强拉曼效应以及免疫标记知识,表面增强拉曼光谱技术可以用于细胞表面标志物的检测分析和癌症的早期诊断。  本文的重点就是利用拉曼光谱技术对药物诱导白血病细胞凋亡过程以及不同白血病类型细胞的识别进行研究分析,主要研究内容如下:  (1)利用拉曼光谱技术,研究雷公藤甲素和柔红霉素诱导Jurkat细胞的凋亡过程,采集不同用药时间的细胞光谱,运用主成分分析法对光谱进行统计分析;并结合荧光染色、原子力显微成像等细胞检测手段,对得到结果进行分析验证。实验结果表明,中药提取物雷公藤甲素具有抗癌的功效,其诱导白血病细胞凋亡的作用机理与细胞周期有关。  (2)结合SERS技术和免疫标记知识,利用拉曼活性分子和抗体标记金纳米粒子,合成SERS标记免疫金纳米探针,用于标记两种类型白血病细胞即Jurkat细胞和Raji细胞,并探测两种细胞的SERS光谱。实验结果表明,30nm的SERS探针的光谱增强效果能到102数量级,同时通过检测标记后的细胞SERS光谱,可以将两种白血病细胞很容易地区别开来。  拉曼光谱技术作为细胞检测的有效工具,可以用于白血病的早期诊断和治疗分析。本文研究为雷公藤甲素治疗白血病提供作用机理参考,为SERS光谱技术快速诊断白血病提供实验方法。
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