【摘 要】
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肝素等硫酸多糖是一类重要的生物分子,它通过与蛋白质相互作用在许多生物学过程中起着重要作用,如信号传导、细胞生长与分化等。研究此类相互作用对深入理解生物和生理过程有
【出 处】
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中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）
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肝素等硫酸多糖是一类重要的生物分子,它通过与蛋白质相互作用在许多生物学过程中起着重要作用,如信号传导、细胞生长与分化等。研究此类相互作用对深入理解生物和生理过程有重要意义,并对以糖为基础的新药研发有促进作用。本文以毛细管电泳(CE)为主要技术平台,结合高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和流式细胞术等系统研究了肝素等硫酸多糖与粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等蛋白质的相互作用。利用毛细管区带电泳(CZE)研究了不同类型蛋白质与肝素的相互作用。发现CZE既可研究动力学上慢速解离平衡体系,又可研究快速解离平衡体系,扩展了CZE的应用范围。发现粒细胞巨嗜细胞集落刺激因子与肝素的相互作用具有特异性,并首次测定了结合常数。利用CZE系统研究了不同分子量、不同来源及不同硫酸化位点的肝素和G-CSF的相互作用,进行了定性和定量测定。首次发现G-CSF能和肝素结合,且结合的强弱与肝素的链长、来源及硫酸化位点有关。发展了一种既适于分离肝素寡糖、又适于研究肝素与蛋白质相互作用的方法。首次在肝素寡糖分离基础上研究其与蛋白质的相互作用,并找到了与G-CSF结合的组分。该方法勿须加入任何添加剂,即可在正向分离模式下使一种肝素酶降解肝素所得寡糖快速达到基线分离。对该寡糖进行了定性研究,未发现三硫酸化二糖,表明所用肝素酶可选择性的降解肝素。用HPLC和MS对该寡糖进行进一步分离和鉴定,得出了各肝素二糖的分子量,与CE所得结果一致。作为肝素的扩充,研究了其它硫酸聚糖和G-CSF的相互作用,并对硫酸聚糖的结构对相互作用的影响进行了定性定量考察。发现糖链长度和硫酸化程度是其与G-CSF相互作用的关键因素。在上述分子水平研究的基础上,将G-CSF与其结合多糖作用于G-CSF依赖鼠髓白血病细胞株,NFS-60。用流式细胞术等多种生物学方法研究了作用后细胞的增值、分化及细胞周期变化等。首次发现了三种硫酸多糖能显著抑制NFS-60细胞生长并诱导其分化为成熟细胞。
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