龙牙百合多糖提取物抗氧化活性及其对肿瘤细胞生长影响

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百合是一味可“药食两用”的传统中草药,是中医药瑰宝。多糖是其中重要的有效成分之一,具有抗氧化,抗肿瘤,降血糖,抗抑郁等多种功能。百合大类的每个品种其成分组成和作用各有不同,很多成分都已证明具有抗氧化和抗肿瘤作用。龙牙百合是湖南省邵阳地区的一个优良栽培品种和优势产业,在隆回县已成为支柱产业之一,是国家地理标志产品,但至今对它的功能活性研究报道较少。本文从优化龙牙百合多糖的提取分离和初步纯化出发,探究其体外抗氧化活性,以及对人肝癌HepG2细胞、人卵巢癌SKOV3细胞和宫颈癌细胞HeLa细胞的生长抑制作用机制。取得了以下结果:1、通过对提取温度、提取时间、料液比、提取次数四因素正交试验,龙牙百合多糖的最优提取工艺为提取温度50℃、提取时间40min、料液比1:7、提取次数5次,在此条件下,龙牙百合多糖的提取率可达8%。2、分别采用Sevag法、酶法、酶-Sevag连用法、有机试剂洗脱法、DEAE-52阴离子纤维素柱纯化法等5种方法对龙牙百合多糖粗提物脱蛋白,结果表明,DEAE-52法脱蛋白效果最佳,可以完全清除蛋白质,能将粗多糖纯化约4倍,并去除色素;酶-Sevag连用法次之,蛋白质的清除率为84.83%,多糖损失控制在20%之内。3、通过将龙牙百合多糖粗提物(LP1)、酶-Sevag连用法提取物(LP2)、有机试剂洗脱法提取物(LP3)、DEAE-52法提取物(LP4)等4种龙牙百合多糖提取物对DPPH自由基、超氧自由基、羟自由基的体外抗氧化能力的研究:结果表明4个提取物对自由基的清除都有一定效果,且与剂量呈正相关,纯化程度越高,其抗氧化能力越强。其中LP4组分的清除能力最佳,LP2和LP1组分的清除能力次之,二者的清除能力基本相同,LP3不显示很明显的抗氧化活性。4、构建了龙牙百合多糖提取物的抗肿瘤细胞活性筛选模型,采用MTT法考察了LP1、LP2、LP4对人肝癌HepG2细胞、人卵巢癌SKOV3细胞、HeLa细胞的抑制影响,结果表明:LP4组分对HepG2细胞的抑制率在1mg/mL时达到46.36%,效果最佳;LP1对HepG2细胞抑制率达到43.23%、LP2最高抑制率24.35%;LP1对SKOV3细胞的抗肿瘤效果最佳;抑制率为35.58%,LP2对细胞抑制率为17.72%、LP4最高抑制率12.5%;三个组分对宫颈癌Hela细胞的抑制率都较低,说明抑制作用不明显。5、采用Annexin-V/PI双染法和western blot法探究了LP1、LP4两个组分对人肝癌HepG2细胞、人卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用机制,结果表明:LP1和LP4对两种细胞的晚期凋亡率显著高于早期凋亡率,上调bax的表达,下调Bcl-2的表达,并能激活caspase-3,caspase-8、caspase-9、Fas、FasL、FADD说明LP1、LP4可能是通过线粒体途径和死亡受体凋亡途径诱导细胞凋亡。
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