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目的:随着国内生活水平逐渐提高及饮食习惯的改变,冠心病(coronary artery disease,CAD)的发病率不断的增加。如何有效的防治冠心病成为医务工作者的重要责任。目前冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass,CABG)是治疗冠心病的最有效手段之一。自1969年Favalora将自体大隐静脉(great saphenous vein,GSV)移植于主动脉和狭窄的冠状动脉之间获得成功以后,以GSV为材料的冠状动脉移植术已经成为了临床上治疗冠状动脉硬化性心脏病的有效手段之一。但是静脉桥的远期通常率成为这一术式的致命缺点,因而如何保护静脉桥预防再狭窄成为了CABG的重点。引起静脉移植再狭窄的主要原因是血管内皮损伤,炎症细胞浸润和血栓形成,继而发生内皮细胞(endothelial cell,EC)增生紊乱,血管平滑肌细胞移行、增殖,移植后动脉化反应[1]。即再狭窄是一种由于手术的物理损伤及缺血再灌注的损伤后的多炎症细胞、多因子介导的局部血管修复反应,是血管重建与再塑的过程。由此可见,炎症反应是其中关键的一环,而白三烯(leukotriene,LTs)是诸多炎症因子中最重要的之一。研究表明血管内皮受到损伤后,单核细胞黏附到血管内皮细胞,启动炎症反应。血管内皮细胞表达一些黏附分子如细胞间黏附分子( intercellular adhesion molecule-1 , ICAM-1)和血管细胞间黏附分子(vascular adhesion molecule-1 ,VCAM-1 ),这些黏附分子分别与其配体β1、β2整合素结合以发挥作用。Friedrich等[2]的研究表明, LTB4能显著增强ICAM-l和VCAM-1与单核/巨噬细胞膜表面配体β1和β2整合素的亲和力,促使单核细胞发生黏附和贴壁,启动内皮炎症反应;LTB4显著促进VSMC发生增殖和迁移,该作用主要由I-κB激酶/ NF2 B通路来介导[3]。由此可见白三烯在细胞受损后的炎症反应与平滑肌移行增殖引起的重塑中起着重要作用.因此,防治早期损伤引起的炎症反应是保护EC功能、预防CABG后血管桥再狭窄中重要的一环。目前有大量保护措施的研究,主要有将静脉桥浸泡于GSV保护液,其中应用最广泛的为浸泡罂粟碱保护液,用以保护静脉桥内皮细胞,罂粟碱主要作用为扩张GSV,无明确抑制早期炎症反应作用,有鉴于此,本课题通过对比加有半胱氨酰白三烯受体拮抗剂(CysLTRAs)Pranlukast的保护液与经典罂粟碱保护液对静脉桥的保护比较,来寻找新的保护液,以期待为临床增加CABG静脉桥远期通常率提供新的思路。方法:本实验以移植健康普通家兔颈外静脉于同侧劲总动脉为动物模型。30只健康普通家兔(河北医科大学动物实验中心提供)随机分为3组:A,B,C,术中获取的颈外静脉以三组不同保护液50mmHg压力冲洗管腔2次后,存放于不同的保护液中(肝素生理盐保护液,罂粟碱保护液,加用Pranlukast的罂粟碱保护液)60分钟,将浸泡后颈外静脉部分取部分静脉做HE染色观察横截面情况,取部分静脉桥送透射电镜观察各组浸泡液对细胞超微结构的影响,剩余部分用于构建静脉桥端侧吻合于劲总动脉间,术后2周对在静脉桥中央部进行活体取材制片,透射电镜进行增生后细胞形态学观察,HE染色观察不同处理组管壁增厚程度的差异,并SP免疫组化染色静脉桥血管,计数统计对比细胞增生率,统计学分析各组间差异,以推断不同处理因素之间疗效的差异。结果:(1)实验过程中共死亡2只实验动物,分别为罂粟碱组与Pranlukast组。(2)存活实验动物桥血管管壁增厚程度(同一实验动物桥静脉HE染色标本,移植前厚度与移植两周后厚度比,L1/L2单位%)比较显示:单因素方差分析各组结果(F=50.16,P<0.05)保护效果有差异;LSD法两两比较各组: Pranlukast组( 297.87±57.08 )和罂粟碱组(478.88±46.61)P<0.05有明显差异;Pranlukast组(297.87±57.08)与肝素组(480.13±27.46)相比P<0.05 ,有明显差异;罂粟碱组(478.88±46.61)与肝素组(480.13±27.46)比较,P>0.05无统计学意义,Pranlukast组减轻桥血管管壁增厚,罂粟碱、肝素两组中远期保护效果无差异。(3)SP免疫组化染色观察各组细胞增殖(增殖阳性细胞数与总细胞数比值,单位%)情况:单因素方差分析各组结果F=56.12,P<0.05,保护效果有差异;LSD法两两比较各组:Pranlukast组(31.23±3.50)和罂粟碱组(53.20±5.84)P<0.05有明显差异;Pranlukast组(31.23±3.50)与肝素组(53.34±5.68)相比P<0.05,有明显差异;罂粟碱组(53.20±5.84)与肝素组(53.34±5.68)比较,P>0.05无统计学意义,Pranlukast组明显抑制桥血管细胞增殖。(4)电镜观察各组标本形态学表现:各保护液浸泡一小时后桥血管标本透射电镜观察可见,肝素组血管内膜层不连续,甚至中断、残缺,细胞连接破坏,内皮细胞水肿,与基底连接不紧密,可见线粒体、内质网等细胞器水肿,部分胞膜不完整,胞浆、细胞器流失,细胞变的疏松,内膜层附着血小板,纤维素等物质,并有部分可见中膜平滑肌暴露;罂粟碱组内膜连续尚可,有局部内膜薄弱疏松,上附着的血小板纤维素等,细胞结构尚完整,线粒体及内质网等细胞器水肿程度较肝素组减轻;此外Pranlukast组内膜上附着的血小板纤维素等明显减少,细胞结构完整,线粒体及内质网等细胞器水肿程度明显减轻,内膜层紧密未见中膜暴露,与基底连接更紧密,内膜层保护更完整。移植后两周桥血管标本透射电镜观察可见:肝素组可见内膜层增厚明显,致密,内皮细胞增大,并可见增生的内质网线粒体的等细胞器,细胞上附着大量纤维素类物质,故成像效果欠佳;罂粟碱组见内膜增厚有少量血细胞、血小板纤维素等附着,内皮细胞明显增大处于增殖期,细胞核致密,线粒体及内质网等细胞器增多,胞浆增多,并可见空泡;Pranlukast组见内膜增厚连续性好少有血细胞、血小板纤维素及炎性细胞等附着,内皮细胞明显增大处于增殖期,细胞核致密,线粒体及内质网等细胞器增多,胞浆增多,可见少量空泡。结论:(1)Pranlukast组对静脉桥血管中远期再狭窄的防治优于罂粟碱保护液组及肝素生理盐水保护液组。因其抑制移植后持续炎症反应,保护血管内膜完整性,一定程度上抑制血管重塑,提高了血管内膜完整性保护效果。罂粟碱保护液组与肝素保护液组对桥静脉中远期保护作用与Pranlukast组相比,效果欠佳且无明显差异,原因是血管移植后,炎症反应持续损伤成为导致再狭窄重要因素,两者无相关抑制作用。(2)单纯观察各保护液浸泡一小时的效果对比罂粟碱组较空白组(肝素组)保护效果好因其可抑制内皮痉挛,保护内膜完整性,在此基础加用Pranlukast更能抑制炎症反应的损害,保护效果更加明显。