酵母双杂交筛选水稻抽穗期调控蛋白Ehd1的互作因子

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jianjiantao456
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水稻(Oryza Sativa)是重要的粮食作物,世界上大约有一半的人以大米为主食。日照长度作为调控水稻生育期的外部信号,对于水稻应对季节变化并尽可能的利用阳光和温度等外部条件以获得最大的生殖成功起着重要的作用。研究水稻的生育期,特别是光周期调控的分子机理,可以帮助人们有效地调控水稻生长,最终提高水稻产量。  目前已初步建立了水稻抽穗期的分子调控网络,Ehd1途径和Hd1途径是主要的、相对独立的控制水稻抽穗的两条途径,大多数水稻抽穗期基因主要通过调控Ehd1的表达来影响抽穗行为。Ehd1是水稻特有的抽穗基因,在拟南芥中没有对应的同源基因。  本研究利用酵母双杂技术筛选与Ehd1互作的候选蛋白,为深入了解Ehd1在信号传导和基因调控方面的具体生化作用机制奠定了基础。  主要结果如下:  1.本研究通过构建功能正常的Ehd1(来源于广陆矮4号,GLA4)全长cDNA诱饵载体,通过Z buffer/X-gal染色证明全长蛋白具有自激活活性,不适合进行酵母双杂筛选;通过分段检测确定了Ehd1的256位-341位氨基酸区段具有转录激活活性,并构建了缺失自激活区的Ehd1诱饵载体。  2.构建了由I7、广陆矮、日本晴3个水稻品种,长短日一昼夜6个时间点的叶片RNA按一定比例混合经反转录后而构建的酵母表达文库。  3.通过文库筛选获得了2个与Ehd1互作的候选克隆,全长互作的验证正在进行中。
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