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目的
观察小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞CD36、PPARY、LPL、lvlMP-9和TIMP一1表达的影响.探讨巨噬细胞在2型糖尿病发病机制中的作用以及小檗碱对糖尿病及其并发症的防治机制。
方法
雄性SD大鼠54只分成四组:正常对照组10只、高脂组M只、2型糖尿病组15只、小檗碱治疗组15只。后三组喂以高糖高脂饲料(饲料组成:lO.0%猪油,20.0%蔗糖,2.5%胆固醇,1.0%胆酸盐,66.5%常规饲料)一个月,诱发胰岛素抵抗,糖尿病组和治疗组继以低剂量链脲菌素(STZ,30mg/kg,)腹腔注射,诱发胰岛素代偿性分泌障碍,使之产生高血糖症,复制2型糖尿病大鼠模型。小檗碱治疗组按lOOmg/kg小檗碱剂量灌胃;对照组、高脂组及糖尿病组灌胃等容积2%羧甲基纤维素钠,每天一次,连续12周。治疗结束后禁食12小时后处死大鼠,取血观测下列指标:血糖、血TC、TG、LDL、HDL及血胰岛素;制备巨噬细胞:运用改良的cohn氏法灌洗和培养腹腔和肺泡巨噬细胞,制成巨噬细胞悬液。并检测巨噬细胞内各指标表达水平的变化:用流式细胞学方法测定各组大鼠肺泡和腹腔巨噬细胞CD36、PPARY的蛋白表达水平:RT-PCR法分别测定肺泡和腹腔巨噬细胞CD36、PPARY、LPL、MMP一9和TIMP—l基因表达水平;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测巨噬细胞oxLDL含量;以化学比色法测定巨噬细胞一氧化氮合酶(NOS)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,硝酸还原酶法测定一氧化氮(N0)含量。
结果
1、血糖、血胰岛素、血脂:与正常对照组相比,2型糖尿病组血糖、血胰岛素、TC、TG和LDL升高(P<0.01),HDL下降(P<0.01)。治疗组血糖、血胰岛素、LDL水平较糖尿病组明显降低(P<0.05),TC、TG也明显降低(P<0.01),HDL较糖尿病组有升高趋势,但无显著性差异。
2、肺泡巨噬细胞内oxLDL的含量,经ELIS^法测定显示:糖尿病组肺泡巨噬细胞oxLDL含量较正常组明显升高(P
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