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研究目的建立阿霉素肾病大鼠模型,观察激素干预对肾病大鼠上颌骨骨密度的影响,为经激素治疗的肾病患者口腔颌骨骨质变化提供理论依据。实验材料和方法1.将60只SPF级6周龄Wistar雄性大鼠随机平均分成两组:正常组和模型组,每组30只,所有大鼠尿蛋白试纸检测为阴性。模型组采用间隔1周2次尾静脉注射盐酸阿霉素4mg/kg建立大鼠阿霉素肾病模型,正常组以同样方法注射生理盐水4mg/kg。注射完成4周末,检测24h尿蛋白总量,各组随机抽10只大鼠取右肾制作HE切片。建模成功后,正常组分为空白对照(A)组,激素(B)组;模型组分为肾病(C)组,肾病+激素(D)组,B、D两组糖皮质激素(30mg/kg·d),A、C两组等体积生理盐水干预,1次/日,共10周。2.第16周末处死,检测血清钙(Ca2+)、磷(P3+)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Scr)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、骨钙素(BGP)、I型原胶原N-端前肽(PINP)及β-I型胶原交联C末端肽(CTX)骨代谢水平。3.将离体标本上颌骨包埋好放置于固定容器内,Micro-CT对标本进行360°扫描,使用Minics10.01软件分割出右上第一磨牙区牙根间牙槽骨并三维重建,获得三维图像。测量骨密度(BMD)、牙槽骨体积分数(BVF)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间隙(Tb.Sp)、骨小梁数目(Tb.N)等参数,对检测结果进行统计分析。4.离体标本脱钙、脱水包埋,切片进行HE染色。实验结果1.大鼠阿霉素注射后,随时间延长,活动度减少,水食量下降,精神萎靡,毛发缺乏光泽、灰暗、松乱,个别大鼠出现尾巴脱皮、糜烂、结痂,24h尿液中尿蛋白含量>100mg/24h。2.肾脏切片观察,正常组:肾皮质、髓质构造清楚,小球毛细血管丛未见增生,肾小球饱满,肾小管构造清楚;模型组:可见系膜细胞轻度增生,基膜增厚,肾小球萎缩,肾小管内可见蛋白管型。3.生化及骨代谢检测显示,除空白对照组外,血清钙(Ca2+)、磷(P3+)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)浓度升高,血清白蛋白(ALB)浓度下降(P<0.05)。骨钙素(BGP)与I型原胶原N-端前肽(PINP)在肾病+激素组中表现出显著性下降(P<0.01),激素组、肾病组与空白对照组对比均有统计学意义(P<0.05)。但激素组和肾病组分析中BGP变化无差异(P>0.05),PINP在该两组中有差异性(P<0.05)。同时β-I型胶原交联C末端肽(CTX)在四组比较中肾病+激素组具有显著性增高(P<0.01)。4.Micro-CT扫描显示:除空白对照组,其余组骨小梁显微结构指数表明,骨密度(BMD)、骨体积分数(BVF)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间隙(Tb.Sp)均具有显著性差异(P<0.01)。肾病+激素组根间骨质骨小梁变化最大,吸收最为明显。Tb.Sp在肾病+激素组及激素组均有增宽,BVF减低,Tb.Th变薄。肾病组骨质特征变化较轻。骨小梁数目(Tb.N)在各组骨质变化中无统计学差异(P>0.05)。5.组织病理学观察:激素组、肾病组、肾病+激素组三组大鼠骨小梁呈现不同程度的稀疏、细小、间距变宽,排列无规则,肾病+激素组改变最为明显,呈条索状。空白对照组大鼠骨小梁粗大致密,分布规则有序。结论1.阿霉素能够快速成功的复制肾病大鼠模型,重复性好,可模拟临床肾病发生发展。2.肾病组、肾病+激素组检测提示肾病自身对其产生影响,激素治疗加重生化指标的变化,二者具有协同性,应定期对肾病患者进行血常规监测。3.骨代谢特异性指标检测表明血清骨代谢指标能客观反映骨密度变化,是监测和诊断骨代谢疾病较为精确和灵敏的参考指标。4.Micro-CT三维扫描提示肾病本身影响骨质吸收,并且激素干预后激素与肾病相互协同加重大鼠骨质破坏的程度。5.组织病理观察显示与Micro-CT表现一致,提示激素干预对颌骨骨微结构产生破坏。