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人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)和戊型肝炎病毒(Hepatitis EVirus，HEV)的衣壳蛋白可自组装成病毒样颗粒(Virus-like particle，VLP)，高度模拟天然病毒颗粒的表面结构，可以激机体产生免疫应答。因此，可以通过研发以VLP为免疫原的疫苗预防病毒的感染及相应疾病的产生。目前，由本实验室与厦门万泰公司联合研发的低危型重组尖锐湿疣疫苗(HPV6/11)已经进入到临床实验阶段，重组戊肝疫苗(Hecolin(@))也于2012年上市，因而，建立针对颗粒性抗原的质量分析方法是非常重要的。重组VLP疫苗的结构和功能是保证其能够安全有效应用的两个“关键质量属性”，本研究针对这两个关键质量属性建立针对两种重组VLP疫苗（尖锐湿疣疫苗和戊肝疫苗）的全方位的质量分析体系，包括生物物理、生物化学及免疫化学质量分析方法，旨在为VLP疫苗效力评价、生产放大、工艺改进等方面提供更多科学依据及技术保证。 首先，对本实验室现有HPV6和HPV11单抗的亚型、与抗原的结合能力、构象敏感性、中和活性、血凝抑制活性、血清阻断率及型别特异性等性质进行分析和鉴定。并据此筛选出7株代表性HPV6单抗(18D2、10H1、11B10、12H4、5D3、17D5和13H5)和8株代表性HPV11单抗(2A2、4A1-3、16G7、10D6、14A6、9C12、19C7和18D3)用于尖锐湿疣疫苗的免疫化学质量分析方法的建立。 其次，利用上述筛选出的单抗建立了尖锐湿疣疫苗的免疫化学质量分析系统，包括:基于无分子标记测定的表面等离子共振法（SPR法）、基于抗原“溶液中”构象测定的竞争ELISA法（IC50法）以及基于两个关键表位测定的双抗夹心ELISA（rEC50法）。针对HPV6抗原，三种方法分别涉及5株、5株和2株单抗;针对HPV11抗原，三种方法分别涉及8株、8株和2株单抗。同时对上述三种方法的重现性进行考察，RSD(％)均小于20％，重现性良好。 最后，本研究应用已建立的HEV疫苗多表位免疫化学质量分析系统对HEV疫苗(Hecolin(@))的实时稳定性、热加速稳定性和免疫效果进行评价。研究中，考察了在4℃储存了24个月的HEV疫苗的体内效力(ED50)、抗原完整性、热稳定性、颗粒性及抗原性等，发现疫苗在4℃储存24个月后性质变化不大。研究中还将五批HEV疫苗分别置于25℃、37℃、42℃、50℃和60℃不同时间，用双抗夹心ELISA(3A11:p239:8C11-HRP)对疫苗的抗原性进行分析，发现与4℃相比，五批疫苗在25℃和37℃处理24周的情况下，相对抗原性rEC50在1±0.2之间，基本保持原有活性;在42℃、50℃和60℃处理8周时相对抗原性均有下降，尤以60℃处理条件下降最为明显。对HEV疫苗免疫质量的考察证明疫苗具有较强的免疫原性。系统的免疫分析手段及HEV疫苗稳定性信息为后续体外相对效力评估（In vitro relative potency assay，IVRP）替代动物实验研究、疫苗工艺放大以及HEV联合苗的研发提供了强有力的技术保证和数据支持。 综上所述，本研究建立了尖锐湿疣疫苗的多表位免疫化学质量分析系统，另外，利用已建立的HEV疫苗免疫化学质量分析方法进行疫苗稳定性研究。多表位免疫化学质量分析系统的建立不仅为疫苗的体外相对效价评估奠定了基础，相对于动物实验大大降低了检测成本和分析周期，还为今后其它重组VLP疫苗的相对效价评估提供了借鉴模式。